Дифференцировка сконструированных плюрипотентных стволовых клеток человека в функциональные мотонейроны

Возьмем, к примеру, индуцированные плюрипотентными стволовыми клетками человека, или иПСК, колонии, культивируемые на пластине, покрытой внеклеточным матриксом.

ИПСК генетически модифицированы для экспрессии факторов транскрипции, которые индуцируют дифференцировку моторных нейронов.

Удалите среду и добавьте ферменты, чтобы отделить колонии.

Механически диссоциируйте клетки в одноклеточную суспензию и соберите их.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в средах, содержащих ингибитор, предотвращающий клеточный апоптоз.

Выложите клетки на тарелку с матричным покрытием.

Добавьте свежие дифференцировочные среды, содержащие антибиотик доксициклин и низкомолекулярные ингибиторы.

Доксициклин индуцирует экспрессию транскрипционного фактора, в то время как ингибиторы блокируют специфические сигнальные пути, способствуя дифференцировке iPSC в предшественники моторных нейронов.

Добавьте ферменты, чтобы отделить клетки.

Соберите клетки и механически диссоциируйте их.

Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в нейронной среде.

Поместите клетки на микрослайды, покрытые белками адгезии, чтобы способствовать адгезии клеток.

Факторы