$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Поместите предметное стекло с неподвижным образцом ткани в буфер для извлечения антигена и нагрейте его.
Повышенная температура и щелочной pH буфера разрывают индуцированные фиксацией белковые сшивки, обнажая эпитопы антигенов.
Охладите предметное стекло, чтобы предотвратить повреждение тканей под воздействием тепла, затем промойте, чтобы удалить излишки буфера.
Нанесите гидрофобный барьер и поместите предметное стекло в камеру влажности.
Добавьте буфер, блокирующий пермеабилизацию. Детергент буфера проникает в клеточные мембраны, а блокирующие белки маскируют неспецифические участки связывания, уменьшая фоновое окрашивание.
Удалите излишки буфера, добавьте коктейль антител, конъюгированных с металлами, и инкубируйте, чтобы антитела могли связываться с определенными антигенами.
Промойте предметное стекло, удаляя несвязанные антитела.
Добавьте сопряженный с металлом ядерный краситель, который проникает в клетки и связывается с ДНК.
Смойте лишнее пятно и высушите предметное стекло.
Используя оптический сканер, можно получить изображения структурных особенностей ткани с высоким разрешением, что помогает интерпретировать данные визуализационного анализа масс-цитометрии окрашенного образца.
Начните с предварительно обработанного участка ткани толщиной пять микрометров, установленного на предметном стекле, совместимом с иммуноокрашиванием. Поместите слайды в почтовую программу для слайдов.
Для извлечения эпитопов с помощью нагрева или HIER добавьте буфер HIER в почтовую машину до полного погружения ткани. Поместите задвижку в камеру для снятия маскировки и запустите программу нагрева.
После завершения программы поместите слайдер в лоток, наполненный холодной водой, и дайте ему остыть. Промойте горки дистиллированной водой несколько раз, постепенно увеличивая объем.
Извлеките слайды из почтовой программы для слайдов и сотрите лишний буфер. Чтобы предотвратить потерю блокирующего буфера и антител, обведите ткань с помощью гидрофобной барьерной ручки.
Инкубируйте предметные стекла в специальной камере влажности в течение одного часа. Для неспецифической блокировки добавьте блокирующий буфер на предметные стекла в камере влажности. После инкубационного периода удалите излишки блокирующего буфера, а оставшийся буфер дайте высохнуть на воздухе при комнатной температуре.
Осторожно нанесите раствор антитела на ткань и инкубируйте в течение ночи в камере влажности при температуре четыре градуса Цельсия.
После инкубации промойте предметное стекло PBS, содержащим Triton, в течение 5 минут. Наконец, дважды промойте предметное стекло PBS в течение 5 минут каждый. Теперь обработайте ткань интеркаляционным красителем и инкубируйте ее в камере влажности при комнатной температуре в течение тридцати минут.
После инкубации промойте предметное стекло водой класса ВЭЖХ в течение пяти минут, а затем просушите в эксикаторе в течение тридцати минут.
После того, как предметное стекло высохнет, отсканируйте его с помощью планшетного сканера документов с разрешением не менее 1200 точек на дюйм.