Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:40 мин. • July 8th, 2025
Начните с культивирования нейронов спирального ганглия на многоэлектрической матрице, или МЭА.
MEA состоит из регистрирующих электродов, подключенных к контактам через цепь.
Промойте MEA, чтобы удалить носитель, и высушите контакты, чтобы избежать шума, вызванного влагой во время записи.
Закрепите MEA на держателе и установите его в систему записи.
Контакты MEA совпадают с разъемами держателя, которые передают электрические сигналы на установку записи.
Добавьте раствор, имитирующий внеклеточную среду, что обеспечит нормальную физиологическую активность нейронов.
Начните запись. Электроды обнаруживают спонтанные сигналы или потенциалы действия, генерируемые нейронами, визуализируемые в виде спайков на программном интерфейсе.
Теперь подайте электрический импульс на один электрод, проявляющий спонтанную активность.
Импульс генерирует электрическое поле, стимулируя нейроны на соседних электродах.
Запишите деятельность, зависящую от стимуляции.
Наконец, добавьте нейротоксин, который блокирует потенциал-зависимые ионные каналы, предотвращая генерацию потенциала действия.
Запишите сигнал для определения фонового шума.
После коллективного 18-дневного культивирования промойте культуру МЭА приготовленным ранее внеклеточным раствором комнатной температуры. Затем высушите контакты чипа MEA кусочком салфетки и установите MEA на держатель MEA. Наконец, установите MEA в систему записи.
После этого добавьте 300 микролитров внеклеточного раствора и подождите 10 минут, чтобы система стабилизировалась перед записью. Теперь запишите спонтанную активность в течение двух минут со всех электродов и определите активные электроды. Затем определите электроды, реагирующие на стимуляцию.
Чтобы исключить артефакт стимуляции, стимулируйте от одного и того же электрода 10 раз. Если культура реагирует по крайней мере в восьми из 10 раз, можно предположить, что это положительный ответ на стимуляцию, вызванную электродами. Чтобы выявить фоновый шум, нанесите на культуру ТТХ в концентрации одного микромоля для блокировки потенциал-зависимых натриевых каналов, а затем записывайте в течение двух минут.