Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:44 мин. • July 8th, 2025
Примите стимуляционную пипетку, содержащую нечувствительные к красному кальцию флуорофоры в искусственной спинномозговой жидкости (ACSF).
Расположите пипетку рядом с целевым нейроном в срезе гиппокампа.
Поместите рядом с мишенью патч-пипетку с записывающим электродом, пропитанным электролитом, содержащим красные нечувствительные к кальцию и зеленые индикаторные флуорофоры кальция.
Применяйте постоянное положительное давление, чтобы кратковременно нарушить поверхность тканей, указывая на близость к цели.
Когда ямочка образуется на мембране нейрона, ослабьте давление, чтобы сформировать уплотнение.
Приложите отрицательное давление, чтобы затянуть уплотнение.
Стабилизируют мембранный потенциал при постоянном отрицательном напряжении.
Продолжайте с отрицательным давлением, чтобы разорвать мембрану, позволяя флуорофорсодержащим электролитам распространяться внутри нейрона.
Визуализируйте красную флуоресценцию целевого дендритного шипика и выровняйте пипетку для стимуляции рядом с ним.
Применяйте электрические импульсы, чтобы открыть кальциевые каналы.
Используйте двухфотонную микроскопию для визуализации временных изменений уровня кальция, на которые указывает зеленая флуоресценция.
На
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео