Микроинъекция препарата с электрофизиологической регистрацией в мозг крысы

Начните с инжектора, электродсодержащей системы впрыска. Он включает в себя микроиглу и электрод из серебряной проволоки, вставленные в стеклянную микропипетку.

Заполните инъектрод раствором исследуемого препарата, содержащим краситель, чтобы облегчить отслеживание распространения препарата в мозге.

Приложите к инжектору шприц, наполненный минеральным маслом. Сотрите лишнюю жидкость.

Закрепите этот инжектор на стереотаксическом блоке и подключите его к системе микронасоса.

Расположите инъекционный ввод на целевой области мозга крысы, находящейся под наркозом, с хирургическим отверстием в черепе.

Постепенно опускайте инжектор, чтобы проникнуть в целевую область.

Остановите установку после получения определенных электрических сигналов, подтверждающих оптимальное размещение инжектора.

Накройте открытый череп теплым агаром, чтобы предотвратить высыхание тканей.

Позвольте мозговой ткани стабилизироваться.

Введите нужную дозировку препарата.

Записывайте электрические сигналы для мониторинга активности нейронов в ответ на вводимый препарат.

Приготовьте инжектор, сначала наполнив минеральным маслом шприц объемом от 5 до 10 микролитров. Далее приготовьте интересующее лекарственное средство с красителем в физиологическом растворе. Здесь 0,5% Chicago Sky Blue смешивается с 300 микромолярной ГАМК. Теперь заполните пипетку для инъекций, сначала загрузив приготовленным раствором шприц объемом 1 миллилитр, а затем с помощью шприца загрузите пипетку.

При извлечении шприца сохраняйте легкое давление на поршень, чтобы вакуум не удалял раствор из инжектора. Проверьте наличие утечки жидкости в возможных местах утечки. Промокните лишнюю жидкость и еще раз проверьте ее на герметичность. Теперь приложите микрошприц с минеральным маслом к инжектору. Затем сотрите излишки раствора марлей.

Проверьте наконечник для инъекции. Через него должна быть возможность пропускания небольших капель раствора. В противном случае он заблокирован или протекает. Теперь надежно закрепите инжектор в системе микронасоса. Затем переместите положение инжектора в целевые координаты и опустите электрод в верхнюю бугорку, которую можно идентифицировать с помощью регистрации визуальных вызванных потенциалов.

Пока электрод опущен, приложите небольшое положительное давление, применяя низкую скорость впрыска, чтобы избежать засорения. Прервите инъекцию, когда структура будет достигнута. После введения инжектора накройте обнаженную кору теплым агаром для предотвращения высыхания. После окончательной установки электрода подождите 30 минут, чтобы обеспечить стабилизацию тканей, окружающих электрод. Затем введите от 400 до 800 нанолитров раствора со скоростью 40 нанолитров в минуту до инактивации нейронной активности в верхнем холмике.

Электрод должен показывать уменьшение спайков во время введения ингибирующего раствора.