Установка целоклеточного пластыря для электрофизиологической записи с плоской сетчатки мыши

Поместите сетчатку мыши, изготовленную с плоским креплением, в физиологический раствор в камере записи.

С помощью микроскопа расположите записывающую пипетку над сетчаткой. Пипетка содержит электрод и заполнена внутренним раствором.

Приложите положительное давление, чтобы предотвратить закупорку пипетки, вставьте ее в сетчатку, а затем уменьшите давление, чтобы избежать повреждения тканей.

Продвигайте пипетку к звездообразным амакриновым клеткам, или SAC, которые синаптически связаны с другими нейронами.

Приближайтесь к клетке до тех пор, пока на ее мембране не образуется ямочка. Ослабьте давление, позволяя мембране прилипнуть к наконечнику.

С помощью отрицательного тока втяните в пипетку мембранный пластырь.

Примените отсасывание для разрыва мембраны, обеспечивая непрерывность между электродом и цитоплазмой клетки, техника, называемая целоклеточным патч-зажимом.

Чтобы записать синаптические токи, подайте напряжение, чтобы поддерживать потенциал мембраны SAC постоянным.

Нейротрансмиттеры, высвобождаемые синаптически связанными нейронами, запускают поток ионов через синаптические рецепторы SAC, измеряемые электродом.

В этой процедуре внутренний раствор фильтруется через шприцевой фи