Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:26 мин. • July 8th, 2025
Возьмите покровную пластинку с рисунком с культурой нейронального кольца в культуральной пластине, содержащей раствор для внеклеточной записи.
Эти клетки предварительно инкубируются с чувствительным к кальцию флуоресцентным красителем для измерения внутриклеточного уровня кальция.
Поместите пластину на предметный столик флуоресцентного микроскопа.
Расположите круглую магнитную катушку, подключенную к магнитному стимулятору, концентрически на подходящем расстоянии над культурой для обеспечения оптимальной стимуляции.
Используя магнитный стимулятор, подайте высокое напряжение и ток через катушку, чтобы создать изменяющееся во времени магнитное поле.
Это магнитное поле индуцирует электрическое поле в нейронах, генерируя потенциал действия.
Достигая нервного окончания, потенциал действия активирует потенциал-зависимые кальциевые каналы, обеспечивая приток кальция в клетку и высвобождение нейротрансмиттеров в синапсе.
Это высвобождение облегчает передачу сигнала к соседним нейронам через синаптические связи.
Из-за притока ионов кальция эти ионы связываются с внутриклеточным кальций-чувствительным красителем, увеличивая флуоресценцию, свидетельствующую об активности нейронов.
Чтобы начать магнитную стимуляцию, поместите под микроскоп культуру нейронов, выращенную по круглым формам. Стимулируйте культуру с помощью стандартной катушки круговой магнитной стимуляции и поддерживающего стимулятора, которые имеются в продаже.
Чтобы стимулировать культуры с помощью нестандартных интенсивностей магнитного поля, подключите к специально изготовленному стимулятору катушку магнитной стимуляции. Затем с помощью лазерной указки выровняйте центр культуры по центру катушки, чтобы обеспечить успешную стимуляцию.
Отрегулируйте положение катушки так, чтобы она оставалась примерно на пять миллиметров выше центра культуры. После того, как катушка стимуляции будет правильно расположена, нагрузите стимулятор до потенциала до пяти киловольт. Затем, используя высоковольтный переключатель высокого тока, разряжайте высокое напряжение и ток через катушку стимуляции, чтобы создать магнитный импульс, который стимулирует активность культивируемых нейронов.