Изучение возбудимости флуоресцентных нейронов с помощью зажима для целых клеток

Возьмите иммобилизованный трансфицированный корональный срез мыши в записывающей камере, перфузированной ХКБ.

Срез содержит разреженную популяцию пирамидальных нейронов, экспрессирующих фермент-мишень и флуоресцентный белок.

Соберите записывающую пипетку, состоящую из внутриклеточного раствора и электрода, подключенного к усилителю для измерения нейронных сигналов.

Микроскопически идентифицируют целевой участок ткани и локализуют флуоресцентный нейрон.

Надавите на пипетку, чтобы предотвратить засорение и продвинуть ее к целевому нейрону.

Положительное давление вызывает небольшое углубление на мембране нейронов при контакте.

Ослабьте давление, образуя плотное уплотнение между мембраной и наконечником.

Установите удерживающий потенциал на постоянное отрицательное значение, чтобы стабилизировать нейрон.

Приложите кратковременное отрицательное давление, чтобы разорвать мембрану, соединив цитоплазму с внутренней частью пипетки и создав конфигурацию всей клетки.

Переключитесь в режим токоизмерительных клещей и подайте импульсы положительного тока, генерируя потенциалы действия, свидетельствующие о возбудимости нейронов.

Перенесите срез в записывающую камеру с помощью пастеровской пипетки