Регистрация нейронной активности развернутой ткани гиппокампа с помощью проникающей микроэлектродной матрицы

Возьмем, к примеру, записывающую камеру, содержащую проникающую микроэлектродную решетку или PMEA, которая записывает электрические сигналы от нервной ткани.

Подключите входное отверстие к флаконам, содержащим оксигенированный aCSF и оксигенированный aCSF с 4-аминопиридином или 4-AP, с помощью трехклапанного разъема.

Подсоедините розетку к вакуумной трубке.

Нагрейте трубопровод между входным и трехстворчатым клапанами до физиологической температуры.

При закрытых входе и выходе перенесите развернутый гиппокамп в камеру.

Расположите гиппокамп под микроскопом на PMEA.

Выньте раствор из камеры.

Поместите тканевый анкер, чтобы удерживать ткань на электродах PMEA.

Откройте входное и выходное отверстия, чтобы запустить поток aCSF.

Инкубируйте ткань с помощью аКСФ, чтобы обеспечить акклиматизацию нейронов.

Затем протоку в КОКСН с 4-AP. 4-AP блокирует нейронные калиевые каналы, увеличивая продолжительность потенциала действия.

PMEA улавливает электрические сигналы, пропорциональные усиленному нейронному возбуждению от нейронов гиппокампа.

При этой процедуре наполните один флакон обычным аКСФ, а другой флакон 4-АР аКСФ. Пузырьки растворов с 95% кислорода и 5% углекислого газа с начала экспериментов. Используйте трехклапанный разъем для управления тем, какое решение будет выбрано во время эксперимента.

Далее подсоедините вакуумную трубку к выходному отверстию камеры, чтобы удалить раствор в контейнер для пыли. Нагрейте трубопровод перед подачей раствора в камеру записи и поддерживайте его температуру на уровне 35 градусов Цельсия. После закрытия входного и выходного отверстий записывающей камеры с помощью изготовленной на заказ стеклянной пипетки перенесите развернутый гиппокамп в записывающую камеру.

Расположите развернутый гиппокамп под микроскопом так, чтобы его видимая сторона была обращена вниз, зона CA3 была направлена в сторону, а поле CA1 было направлено в сторону исследователя. Осторожно отсасывайте раствор из камеры с помощью вакуумной пипетки от края записывающей камеры до тех пор, пока камера не высохнет и ткань не ляжет на решетку.

Затем осторожно поместите изготовленный на заказ тканевый анкер поверх ткани, чтобы удерживать развернутый гиппокамп на массиве. Наполните камеру записи несколькими каплями раствора. Постепенно открывайте входное и выходное отверстия, чтобы отрегулировать скорость потока примерно до двух капель в секунду в капельной камере внутривенного введения.

Инкубируйте ткань в регистрирующей камере с нормальным аКСФ в течение примерно одной минуты. Затем переключите подачу раствора на 4-АР растворенный АКХО и правильно отрегулируйте расход. Инкубируйте ткань в растворенном в 4-АР ФКСЖ в течение примерно 5–10 минут перед регистрацией.