Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:42 мин. • July 8th, 2025
Возьмите записывающую пипетку с проволочным электродом в растворе электролита.
Расположите пипетку над обездвиженным срезом мозга.
Отрегулируйте ток пипетки, чтобы уменьшить фоновые сигналы.
С помощью микроскопа найдите целевой нейрон и переместите пипетку к нейрону.
Приложите небольшое положительное давление и зафиксируйте его.
Положительное давление нарушает поверхность тканей, что свидетельствует о близости к клетке.
Поднесите пипетку ближе, пока на мембране не образуется ямочка, указывающая на правильное положение.
Сбросьте положительное давление.
Наблюдайте за увеличением сопротивления по мере того, как клетка образует уплотнение с пипеткой.
Удерживайте потенциал мембраны на постоянном отрицательном напряжении для стабильности.
Оттяните микропипетку в сторону, чтобы снять избыточное давление.
Отрегулируйте быструю и медленную электрическую реакцию пипетки для обеспечения точности.
Применяйте кратковременное отсасывание, чтобы прорвать ячейку, установив прямое электрическое соединение.
Конфигурация клещей напряжения для всей ячейки теперь готова к электрофизиологической регистрации.
Чтобы получить конфигурацию со всей ячейкой, поместите записывающую пипетку непосредственно над срезом и скорректируйте ток пипетки в режиме Voltage Clamp. Слегка надавите на пипетку и заблокируйте запорный кран.
Далее выберите здоровую клетку с неповрежденной мембраной и подойдите к ткани с помощью пипетки. Положительное давление должно вызвать небольшое нарушение в тканях. Медленно приближайте пипетку к ячейке диагональными движениями до образования небольшой ямочки на поверхности клетки. Затем отпустите блокировку положительного давления. Ячейка начнет образовывать уплотнение, а сопротивление увеличится выше одного гигаом. В зажиме напряжения удерживаем ячейку при напряжении -68 милливольт.
Впоследствии слегка оттяните пипетку от ячейки по диагонали, чтобы снять избыточное давление. Компенсируйте быструю и медленную емкость пипетки. Сделайте кратковременное отсасывание через трубку, соединенную с держателем пипетки, чтобы прорвать ячейку и получить цельную конфигурацию ячейки.