Электрофизиологические записи активности мозга in vivo из нескольких участков у крыс

Начните с крысы под наркозом, закрепленной в стереотаксической рамке с обнаженным черепом.

Используйте опорные точки на черепе для калибровки и обозначения нужных координат.

Просверлите отверстия в отмеченных местах.

Удалите мусор и разрежьте внешний слой мозга.

Часто промывайте отверстия солевым раствором, чтобы предотвратить высыхание.

Просверлите дополнительные отверстия и анкерные винты для поддержки электродов.

Установите электроды сравнения и электрофизиологические регистрирующие электроды. Закрепите их, нанеся акриловую смолу.

Расположите вольфрамовые электроды на микропроволочной раме в соответствии с многоцелевыми местами в мозге.

Несколько электродов позволяют одновременно записывать активность мозга с нескольких целевых участков.

Используя точку отсчета на черепе, расположите вольфрамовые электроды с микропроволокой.

Аккуратно введите их в мозг.

Настройте программное обеспечение для записи для обнаружения активности мозга.

Опустите электроды на заданную глубину и начните запись данных.

Под микроскопом используйте стандартный стереотаксический инструмент для выравнивания крысы, чтобы откалибровать назначенный наконечник по брегме и отрегулировать планку резцов до тех пор, пока назначенные точки для брегмы и лямбды на инструменте не коснутся черепа одновременно. С помощью стереотаксического держателя с канюлей откалибруйте его по брегме и затем рассчитайте положение всех просверленных отверстий на черепе.

Затем отметьте места отверстий, которые необходимо просверлить, тщательно поцарапав череп или используя хирургический цветной маркер. Затем с помощью микродрели тщательно просверлите все отверстия диаметром около 1 миллиметра. Для STN и SNr просверлите общую скважину примерно 2 на 3 миллиметра.

Возьмите одну тонкую канюлю и согните кончик, чтобы получился два крючка. Затем с помощью крючков удалите мусор из отверстий и осторожно отрежьте и удалите твердую мозговую оболочку в общем отверстии STN/SNr. После этого промыть просверленные отверстия физиологическим раствором.

Наносите каплю физиологического раствора каждые 15 минут на отверстия, чтобы предотвратить высыхание мозга и твердой мозговой оболочки. Затем возьмите микродрель и подходящий микровинт из нержавеющей стали. Просверлите отверстие и вкрутите микровинт между отверстиями референсных эпидуральных электродов над мозжечком.

Затем направьте кончики электродов тонким пинцетом и вставьте их прямо под кость черепа в отверстия для сверления. Зафиксируйте все эпидуральные электроды двухкомпонентным стоматологическим акрилом. Убедитесь, что вы не закрываете точку брегмы и не затрагиваете общее отверстие STN/SNr.

Затем вставьте подготовленный держатель с вольфрамовыми микропроволочными электродами в стереотаксическую раму. Откалибруйте самый вентральный электрод по брегме, который предназначен для нацеливания на STN. Отрегулируйте расчетное положение над общим отверстием STN/SNr и опустите электроды вниз к мозгу.

Убедитесь, что электроды с вольфрамовым микропроводом плавно входят внутрь мозга. В этой процедуре настройте программное обеспечение для записи, такое как полосовой фильтр, и усилите необработанный сигнал данных. Затем используйте онлайн-фильтр LFP и спайк-фильтр с соответствующими настройками.

Для всех фильтров используйте фильтр типа Баттерворта. Настройте пороговое значение пиков для сортировки по пикам в интернете. Большинство программ для записи позволяют установить порог пика, который является значением амплитуды выше порога, при котором сигнал помечается программным обеспечением как пик. Далее медленно опустите электроды из вольфрамовой микропроволоки на 1 миллиметр выше СТН и дождитесь стабилизации сигнала при необходимости.