Оптическая регистрация активности нейронов в срезах мозга, окрашенных потенциал-чувствительным красителем

Возьмем иммобилизованный срез мозга мыши, окрашенный потенциал-чувствительным красителем или VSD, флуоресцентными молекулами, которые интегрируются в мембрану нейронов и реагируют на изменения потенциала мембраны.

Поместите ломтик в камеру для записи.

Установите заземляющий электрод для опорного напряжения базовой линии.

Далее расположите стимулирующие и записывающие электроды на срезе.

Подайте электрический импульс.

Импульс стимулирует нейроны, вызывая потенциал-зависимое открытие натриевого канала и приток ионов натрия, что приводит к изменению мембранного потенциала.

Это индуцирует потенциал действия, измеряемый записывающим электродом, и изменяет флуоресцентные свойства VSD.

Подвергните срез мозга воздействию определенной длины волны, чтобы возбудить VSD и запустить флуоресцентное излучение.

После стимуляции натриевые каналы закрываются, в то время как потенциал-зависимые калиевые каналы открываются, способствуя оттоку ионов калия.

Это снова изменяет мембранный потенциал и, следовательно, изменяет флуоресценцию частотно-регулируемого привода.

Записывайте флуоресценцию в режиме реального времени, чтобы визуально представить активность нейронов.

Чтобы начать эту процедуру, включи