Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:10 мин. • July 8th, 2025
Возьмем иммобилизованный срез мозга мыши, окрашенный потенциал-чувствительным красителем или VSD, флуоресцентными молекулами, которые интегрируются в мембрану нейронов и реагируют на изменения потенциала мембраны.
Поместите ломтик в камеру для записи.
Установите заземляющий электрод для опорного напряжения базовой линии.
Далее расположите стимулирующие и записывающие электроды на срезе.
Подайте электрический импульс.
Импульс стимулирует нейроны, вызывая потенциал-зависимое открытие натриевого канала и приток ионов натрия, что приводит к изменению мембранного потенциала.
Это индуцирует потенциал действия, измеряемый записывающим электродом, и изменяет флуоресцентные свойства VSD.
Подвергните срез мозга воздействию определенной длины волны, чтобы возбудить VSD и запустить флуоресцентное излучение.
После стимуляции натриевые каналы закрываются, в то время как потенциал-зависимые калиевые каналы открываются, способствуя оттоку ионов калия.
Это снова изменяет мембранный потенциал и, следовательно, изменяет флуоресценцию частотно-регулируемого привода.
Записывайте флуоресценцию в режиме реального времени, чтобы визуально представить активность нейронов.
Чтобы начать эту процедуру, включите усилитель, компьютер и систему камер и откройте программное обеспечение. Налейте aCSF в 50-миллилитровую пробирку, и заварите ее карбогеном. Используйте перистальтический насос для циркуляции aCSF и отрегулируйте скорость потока примерно до одного миллилитра в минуту.
Затем отрегулируйте высоту всасывающего пипетки так, чтобы уровень жидкости внутри экспериментальной камеры всегда был постоянным. Поместите заземляющий электрод в камеру. Затем заполните стеклянный электрод небольшим количеством аликвора и поместите его в держатель электродов. Прикрепите держатель к стержню манипулятора.
Используя усилитель, убедитесь, что сопротивление электрода составляет примерно 1 мегаом. Во время сеанса записи перенесите срез из влажной камеры в экспериментальную камеру. Плотно прижмите край кольца к силиконовому уплотнительному кольцу. Будьте осторожны, чтобы не повредить мембрану или дно экспериментальной камеры.
Поместите под микроскоп наконечник стимулирующего электрода и электрод, регистрирующий потенциал поля, на срез. Проверьте вызванную реакцию, подав стимул. Убедитесь, что поле зрения охватывает правую нейронную цепь в оптической системе записи.
Затем отрегулируйте интенсивность возбуждающего света примерно до 70–80% от максимальной емкости камеры. Используя флуоресцентный источник света, отрегулируйте фокусировку с помощью системы захвата. Затем начните запись и проанализируйте данные в программном обеспечении для получения изображений после сбора.