Запись обонятельных сенсорных нейронов у мышей с помощью перфорированного патч-зажима

Возьмем, к примеру, отрубленную голову генетически модифицированной мыши. Обонятельный эпителий в его носу содержит обонятельные сенсорные нейроны, или OSN, с рецепторами запаха, помеченными флуорофорами.

Снимите кожу и рассеките голову, чтобы изолировать перегородку с прикрепленным обонятельным эпителием.

Отделите и закрепите эпителий в записывающей камере.

Используя флуоресцентный микроскоп, обнаружите меченые рецепторы, нацеленные на дендритный бугорок OSN.

Возьмите с собой записывающую пипетку с внутриклеточным раствором, содержащим нистатин, антибиотик, перфорирующий мембрану.

Прилагайте положительное давление, чтобы избежать засорения пипетки. Вставьте пипетку в эпителий и подойдите к ОСН.

Переключиться на отрицательное давление, образуя уплотнение с клеточной мембраной. Подайте ток для поддержания мембраны в состоянии покоя.

Нистатин перфорирует мембрану, позволяя измерять внутриклеточные ионные токи.

Расположите пипетку, содержащую стимулятор запаха, рядом с ОСН. Высвободите стимулятор, который связывается с рецепторами запаха, запуская открытие ионных каналов для обеспечения притока ионов. Запишите полученные электрофизиологические сигналы.

Для этого протокола должны быть