Регистрация нейронной активности у свободно движущихся мышей с помощью волоконной фотометрии

Начните со свободно движущейся мыши с имплантированной оптоволоконной канюлей.

Подключите один конец оптоволоконного патч-корда к канюле, а другой конец к возбуждающему источнику света.

Мышь экспрессирует генетически кодируемый индикатор кальция с зеленой флуорофорной меткой, или GECI, в латеральной области гипоталамуса, или нейронах LHA.

Имплантированное оптическое волокно контактирует с латеральной областью поводка, или LHb, где заканчиваются аксоны LHA.

Возбуждайте GECI на оптимальной длине волны возбуждения и записывайте базовый сигнал.

Теперь нанесите на мышь повторные затяжки воздуха, чтобы вызвать отвратительную реакцию на стресс.

Этот стимул запускает потенциалы действия в клеммах аксонов LHA, открывая потенциал-зависимые кальциевые каналы и обеспечивая приток кальция.

Внутриклеточные ионы кальция связываются с GECI, вызывая конформационные изменения, которые увеличивают излучение зеленой флуоресценции.

Визуализируйте оптический сигнал.

Повышенная флуоресценция в ответ на затяжки воздуха у мыши подтверждает роль пути LHA-LHb в передаче аверсивных сигналов.

Начните с осмотра дистального конца волокон патч-корда на глаз и с помощью мини-волоконного микроскопа. Если поверхность волокон поцарапана, повторно отполируйте волокна с помощью пленки для полировки волокон с мелкой зернистостью. Затем очистите дистальные концы патч-корда 70% этанолом и аппликатором с ватным наконечником. Очистите оптоволоконные канюли с помощью 70% этанола и аппликатора с ватным наконечником.

Соедините наконечник патч-корда с имплантируемым волокном с помощью керамической разъемной втулки, покрытой черной термоусадочной трубкой. Во время соединения следите за тем, чтобы рукав был плотно затянут. Дайте животному прийти в себя в течение нескольких минут, затем начните запись оптического сигнала и проведите эксперимент. Во время записи внимательно следите за трассировкой в реальном времени, чтобы обеспечить качество записи, и следите за любыми скачками сигнала, указывающими на то, что рукав недостаточно тугой.