Определение влияния тестового гормона роста на нейроны кисспептина с помощью цельноклеточного зажима

Закрепите трансгенный срез гипоталамуса мыши в записывающей камере, перфузированной с аКСФ.

Срез содержит флуоресцентные нейроны кисспептина, экспрессирующие белок слияния, которые имеют решающее значение для регуляции репродуктивной системы.

Соберите микропипетку, состоящую из записывающего электрода, во внутреннем растворе.

Микроскопическое определение местоположения флуоресцентного кисспептинового нейрона.

Надавите на пипетку и продвигайте ее к целевому нейрону. При контакте давление создает углубление на мембране нейрона.

Приложите кратковременное отрицательное давление, образуя высокопрочное уплотнение между микропипеткой и мембраной.

Установите удерживающее напряжение на физиологический потенциал покоя нейрона для точных измерений.

Применяйте короткие импульсы отрицательного давления, чтобы разорвать мембрану, создавая конфигурацию всей клетки.

Подтвердите жизнеспособность нейрона, отслеживая параметры.

Введите тестовый гормон роста, запускающий сигнальные пути и вызывающий изменения мембранного потенциала нейрона.

Измерьте изменения мембранного потенциала, чтобы определить ингибиторное влияние гормона роста на активность нейронов.

Переносите интересующий вас срез мозга по од