Регистрация локального полевого потенциала в срезах гиппокампально-энторинальной коры мыши

Закрепите срез гиппокампально-энторинальной коры головного мозга мыши в погружной камере записи.

Непрерывный поток насыщенного кислородом ACSF при постоянной температуре для поддержания жизнеспособности тканей.

Расположите стимулирующую пипетку, наполненную раствором электролита, в лучевом слое области CA3 гиппокампа, содержащую нейроны, получающие информацию от энторинальной коры.

Вставьте заполненную ACSF записывающую пипетку в пирамидальный слой области CA1, состоящий из нейронов, которые образуют синапсы с аксональными проекциями от CA3.

С помощью пипетки для стимуляции подайте электрический импульс для запуска потенциалов действия в пресинаптических нейронах CA3.

Потенциал действия индуцирует высвобождение нейротрансмиттеров, которые связываются с рецепторами на постсинаптических нейронах CA1. Связывание индуцирует приток ионов, что приводит к изменению мембранного потенциала.

Комбинированные изменения мембранного потенциала нескольких постсинаптических нейронов CA1, называемые локальным полевым потенциалом или LFP, регистрируются внеклеточно записывающей пипеткой.

Чтобы зарегистрировать локальные полевые потенциалы, наполните стакан объемом 400 миллилитров карбогенным пузырем ACSF и поместите один конец трубки насоса в стакан. Включите перистальтический насос со скоростью от восьми до 10 миллилитров в минуту, чтобы направить ACSF из 400-миллилитрового стакана в нагретый резервуар и из резервуара в камеру регистрации при температуре 32 градуса Цельсия.

Далее кратковременно зажмите трубку, и выключите насос, чтобы приостановить поток. С помощью тонких щипцов перенесите срез мозговой ткани в записывающую камеру за угол линзовой бумаги, на которой лежит ткань, срежьте вниз. Снимите с линзовой бумаги бумагу, оставив срез погруженным в камеру звукозаписи, и закрепите срез с помощью арфы.

С помощью ручного микроманипулятора медленно продвигайте кончик пипетки для стимуляции, наполненной хлоридом натрия, на поверхность среза под углом от 30 до 45 градусов. Затем с помощью второго микроманипулятора медленно продвигайте наконечник заполненного ACSF пипетки с локальным полевым потенциалом в интересующую область под углом от 30 до 45 градусов и зарегистрируйте потенциал локального поля образца в соответствии со стандартными протоколами.