Комбинированная регистрация механически стимулированного афферентного выхода и маркировки нервных окончаний в волосяных фолликулах мышей

Начните с рассеченной мышиной ушной раковины, или наружного уха, с обнаженными соединенными нервами.

Вставьте нерв, предназначенный для записи, в записывающий электрод.

Удалите жировой слой возле края ушной раковины, чтобы обнажить основание волосяного фолликула, затем сложите кожу, чтобы обнажить волоски для стимуляции.

Расположите щуп механической стимуляции так, чтобы касаться и отклонять волоски.

Эта стимуляция активирует чувствительные нервные окончания, открывает механически затворенные ионные каналы, обеспечивает положительный приток ионов и генерирует потенциалы действия.

Потенциалы действия распространяются через эти окончания к регистрируемому нерву. Визуализируйте сигнал.

Далее добавьте флуоресцентный краситель и продолжайте стимуляцию волос.

Краситель связывается со стимулированными мембранами нейронов и интернализуется посредством эндоцитоза, не влияя на активность нейронов.

После стимуляции промойте для удаления несвязанного красителя.

Добавьте секвестрирующий агент для удаления неинтернализованного красителя, связанного с мембраной.

С помощью флуоресцентной микроскопии визуализируйте окрашивание волосяных фолликулов, чтобы выявить механически стимулированные нервные