Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:23 мин. • July 8th, 2025
Возьмут под контроль и трансгенные личинки плодовой мухи дрозофилы.
Трансгенные личинки экспрессируют светочувствительный ионный канал в нейронах обонятельных рецепторов или ORN. Эти нейроны являются частью обонятельной цепи, которая обнаруживает неприятные стимулы и передает сигналы в мозг, направляя движения личинок в ответ на раздражители.
Поместите личинок на блюдо с застывшей агарозой внутрь поведенческой арены, и накройте блюдо.
Подвергайте личинок воздействию света на длину волны, которая стимулирует ионные каналы и записывает навигационное поведение личинок.
Свет активирует полностью транс-ретиналь, хромофор, который вызывает открытие ионных каналов, известное как оптогенетическая стимуляция, и обеспечивает приток катионов.
Приток генерирует потенциалы действия, которые передают сигналы по обонятельному контуру, влияя на навигационное поведение личинок.
Трансгенные личинки со светочувствительными ионными каналами демонстрируют изменение расстояния, пройденного по прямой линии, прежде чем изменить направление, известное как длина пробега, по сравнению с контрольными личинками.
Для поведенческого анализа поддерживайте постоянную температуру и влажность в комнате для поведенческих анализов. Приготовьте личиночную среду для ползания, насыпав 150 миллилитров растопленной 1,5%-ной агарозы в чашку Петри размером 22 на 22 сантиметра.
Дайте агарозе застыть и остыть в течение 1-2 часов в чашках Петри, прежде чем использовать их в поведенческом анализе. После того как агароза застынет, перенесите не более 20 подготовленных личинок третьего возраста в центр чашки Петри и накройте чашку Петри крышкой.
Поместите чашку Петри на поведенческую арену под ПЗС-камерой. Включите 850-нанометровый инфракрасный светодиодный источник света, чтобы визуализировать личинок на видео. Запустите ПЗС-камеру, чтобы зафиксировать движение личинок. Наконец, перейдем к обработке и анализу данных.