Измерение нейронной активности в срезе мозга мыши после длительной инкубации

Закрепите срез мозга мыши в записывающей камере, перфузированной кислородосодержащей aCSF после длительной инкубации.

Клетки в срезе загружены индикатором кальция, облегчающим внутриклеточное измерение кальция.

Возьмите записывающую пипетку, содержащую электрод в растворе электролита.

Определите целевой нейрон. Расположите записывающую пипетку с положительным давлением на клеточную мембрану, создав ямочку.

Приложите отрицательное давление, чтобы создать герметичное уплотнение.

Далее применяются импульсы отрицательного давления, разрывая мембрану и создавая конфигурацию целой клетки.

Перфузируют aCSF с высокой концентрацией калия, который деполяризует мембрану нейрона.

Деполяризация открывает натриевые каналы, запуская потенциал действия, который, в свою очередь, активирует потенциал-зависимые кальциевые каналы и обеспечивает приток кальция.

Ионы кальция связываются с индикатором, усиливая флуоресценцию, которую можно визуализировать при подходящем освещении.

Увеличение внутриклеточной флуоресценции, вызванное притоком кальция после применения калия, указывает на жизнеспособность нейронов после длительной инкубации.

Для записи поместите ткань в погружную записывающую камеру под микр