Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:20 мин. • July 8th, 2025
Начните с электрофизиологической установки, содержащей иммобилизованный сегмент толстой кишки мыши в сбалансированном растворе электролита.
Толстая кишка имеет обнаженный большой тазовый ганглий с предварительно рассеченной афферентной чувствительной нервной ветвью толстой кишки, которая передает сигналы от толстой кишки к мозгу.
Толстая кишка канюлируется с обоих концов трехходовыми клапанами для инфузии физиологического раствора.
Заполните записывающий электрод и расположите его рядом с афферентным нервом.
Применяйте мягкое отсасывание, чтобы втянуть нерв в электрод, образуя плотное уплотнение.
Контролируйте исходный электрический сигнал нерва и внутреннее давление в толстой кишке.
Закройте кран на выпускной канюле, непрерывно вводя физиологический раствор в толстую кишку.
Это вызывает постепенное повышение давления внутри толстой кишки, что приводит к растяжению толстой кишки и стимуляции афферентного нерва.
Повторно запишите нервный сигнал и давление в толстой кишке.
Постепенное повышение нервного сигнала при повышенном давлении подтверждает стимуляцию афферентного нерва.
Осмотрите предварительно вытянутую стеклянную пипетку под препарирующим микроскопом. Сломайте кончик электрода парой щипцов так, чтобы его размер был совместим с диаметром регистрируемого нерва. После этого снимите фаску с кончика, поместив его рядом с более светлым бликом.
Люди, плохо знакомые с этой методологией, также могут столкнуться с проблемой скоса кончика электрода, совместимого с размером нерва.
Далее поместите скошенный электрод в держатель электрода. Затем подсоедините 10-миллилитровый шприц к боковому порту держателя для приложения отрицательного или положительного давления к электроду. После этого подключите держатель к головному столу биоусилителя, и установите головной столик на манипулятор.
После этого переместите электрод в тканевую ванночку и заполните электрод раствором Кребса, применяя мягкое всасывание, до тех пор, пока он не соприкоснется с серебряной проволокой держателя. Затем поместите кончик электрода близко к отрезанному концу нерва и приложите отрицательное давление, чтобы всосать нерв в электрод. Затем приложите больше отрицательного давления, чтобы около 1 миллиметра нерва втянулось в электрод и образовало плотное уплотнение.
Теперь включите биоусилитель и установите фильтр на частоту от 300 до 3000 герц. Отслеживайте сигнал на осциллографе и записывайте сигнал нерва и сигнал внутрипросветного давления в программном обеспечении для обработки данных Spike. Затем примените рампу для растяжения толстой кишки, закрыв трехсторонний кран на выходной канюле при непрерывном внутрипросветном вливании. Следите за внутрипросветным давлением, пока оно не достигнет 60 миллиметров ртутного столба.