Оценка митохондриальной функции эндотелиальных клеток сосудов головного мозга

Начните с эндотелиальных клеток сосудов головного мозга или ЦВЭ в питательных средах.

Клетки CVE — это высокоэнергетические клетки, которые выстилают кровеносные сосуды мозга и необходимы для физиологии мозга.

Поместите клетки в планшет для культивирования клеток с внеклеточным потоком. Инкубация для прикрепления клеток.

Замените питательные среды на внеклеточные среды для анализа потока, которые имеют желаемый уровень pH.

Инкубируйте без углекислого газа для поддержания pH.

Далее возьмите картридж с внеклеточным датчиком потока, который включает в себя датчики и нижнюю пластину.

Добавьте в планшет калибровочный раствор и инкубируйте без углекислого газа, чтобы гидратировать датчики.

Эти датчики могут измерять изменения концентрации кислорода во внеклеточной среде, что свидетельствует об активности митохондрий.

Затем загрузите картридж в биоанализатор и откалибруйте датчики.

Замените нижнюю пластину пластиной, содержащей ячейки.

Измерьте митохондриальную функцию клеток CVE.

После соответствующего количества субкультур высейте 1,6 х 10⁴ клетки в 80 микролитрах полной среды на лунку на 96-луночный планшет для культивирования внеклеточных клеток и поместите планшет в инкубатор с температурой 37 градусов Цельсия с 5% углекислым газом.

За день до анализа митохондриальной функциональной оценки увлажните картридж датчика внеклеточного потока 150 микролитрами раствора калибранта внеклеточного потока и инкубируйте планшет в течение ночи при температуре 37 градусов Цельсия без углекислого газа.

На следующее утро с помощью станции промывки пластин измените среду для культивирования клеток на среду для анализа внеклеточного потока pH 7,0, затем инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия без углекислого газа в течение 30-60 минут. Когда клетки уравновесятся, загрузите гидратированный картридж в биоанализатор и нажмите кнопку «Пуск», чтобы начать калибровку.

В конце калибровки нажмите на запрос «Разблокировать картридж», чтобы снять нижнюю пластину картриджа, и загрузите пластину ячейки, затем откройте файл данных, чтобы получить значения скорости от биоанализатора для экспорта в файл электронной таблицы.