Регистрация активности брыжеечного афферентного нерва в сегменте тощей кишки мыши ex vivo

Начните с записывающей камеры, содержащей рассеченный сегмент тощей кишки мыши, часть тонкой кишки, погруженную в раствор электролита и закрепленную штифтом.

Сегмент тощей кишки включает в себя окружающую жировую ткань с предварительно рассекреченным брыжеечным афферентным нервом, который передает сигналы от тощей кишки к мозгу.

Сегмент подключен к входным и выходным отверстиям камеры для потока раствора.

Возьмите всасывающий электрод, подключенный к микроманипулятору и записывающему блоку.

Заполните всасывающий электрод раствором электролита и расположите его рядом с брыжеечным афферентным нервом.

Примените мягкое отсасывание, чтобы потянуть нерв с окружающей жировой тканью, чтобы сформировать плотное уплотнение.

Закройте выпускное отверстие при сохранении притока, чтобы постепенно увеличивать внутреннее давление и растяжение тощего сегмента.

Это вызывает возбуждение брыжеечного афферентного нерва вокруг тощей кишки, генерируя электрический сигнал.

Запишите активность афферентного нерва в ответ на изменения давления в тощей кишке.

При этой процедуре с помощью микроманипулятора опускают кончик отсасывающего электрода в ванночку с органом. Затем осторожно отсасывайте немного раствора Кребса из ванны с органом так, чтобы кончик электрода был погружен в раствор Кребса. Убедитесь, что раствор Кребса покрывает проволочный электрод внутри всасывающего электрода.

Затем расположите кончик всасывающего электрода непосредственно рядом с пересеченной афферентной нервной нитью и втяните пересеченную нервную цепь в капилляр по всей ее длине. Поверните кончик электрода в сторону жировой ткани, и втяните его в стеклянный капилляр с помощью поршня, тем самым механически запечатав нерв в капилляре от содержимого органной ванны.

Чтобы проверить регистрацию афферентной нервной активности, выполните индуцированное растяжением увеличение афферентного возбуждения путем закрытия выходного порта, что приведет к постепенному повышению давления в кишечном сегменте. Выполняйте требуемый протокол эксперимента только в том случае, если три последовательных растяжения линейного изменения дают воспроизводимый многоединичный разряд.