Имплантация электродного узла в мозг мыши для электрофизиологической регистрации

Закрепите мышь под наркозом на стереотаксической раме, содержащей грелку для поддержания температуры тела.

Нанесите лубрикант, чтобы предотвратить пересыхание глаз, и введите раствор электролита подкожно для поддержания увлажнения.

Удалите шерсть с кожи головы, продезинфицируйте область и введите обезболивающее средство подкожно, чтобы уменьшить боль.

Сделайте надрез, чтобы обнажить череп, затем очистите его, чтобы сделать анатомические ориентиры видимыми для идентификации областей мозга.

Нанесите стоматологический клей и затвердейте его с помощью отверждающего света, чтобы помочь имплантации электродов.

Просверлите отверстия над гиппокампом и мозжечком, а также установите электродный узел с помощью держателя на стереотаксической раме.

Биполярные электроды регистрируют активность гиппокампа, в то время как электрод сравнения получает базовую активность от мозжечка.

Вставьте электроды, закрепите узел стоматологическим цементом и отсоедините от держателя.

Снова введите раствор электролита и обезболивающее.

Дайте мыши полностью восстановиться перед выполнением электрофизиологической записи.

Прежде чем приступить к операции, запишите вес 8-недельных мышей VGAT-Cre. Затем поместите животное в индукционную камеру, чтобы вызвать анестезию. Поместите мышь под наркозом на грелку при температуре 37 градусов Цельсия. Если вы используете температурную систему с обратной связью, вставьте температурный зонд в прямую кишку животного для контроля температуры во время операции. Чтобы начать операцию, перенаправьте поток ингаляционной анестезии к носовому конусу и установите животное в стереотаксическую раму, аккуратно поместив передние верхние зубы в резец и переместив конус на нос, затем поместите ушные планки в уши и прикрепите к стереотаксической раме.

Убедитесь, что голова животного выровнена и отцентрирована и не может быть сдвинута при легком прощупывании. После того, как животное будет установлено, введите 0,5 миллилитра нормосола мышам для гидратации и нанесите глазную смазку, чтобы предотвратить высыхание роговицы. Следите за глубиной анестезии, зажимая палец задней конечности. Если абстинентный рефлекс отсутствует у животного, приступайте к удалению шерсти на голове мыши вокруг хирургической области. Когда это будет сделано, продезинфицируйте чистый участок кожи трижды, чередуя применение этанола и йода, и введите подкожно 0,05 миллилитра 0,25% бупивакаина.

Сделайте надрез на черепе с помощью скальпеля, а затем вырежьте участок кожи хирургическими ножницами, обнажая череп. Отодвиньте кожу в сторону перед очисткой черепа от всех подлежащих тканей ватным тампоном. Очистите череп перекисью водорода с помощью стерильных ватных палочек и сделайте видимыми швы черепа, брегму и лямбду. С помощью стереотаксически установленной дрели переместите наконечник сверла на брегму и нулевые координаты x, y и z, затем поднимите и переместите сверло в положение лямбда, чтобы определить его координаты и определить, находится ли головка на одном уровне.

После тщательного просушки черепа нанесите аппликатором одну каплю самопротравливающего стоматологического клея. Подождите 60 секунд, прежде чем отверждать стоматологический клей с помощью стоматологического ультрафиолетового излучения в течение 40 секунд. Глянцевая поверхность указывает на то, что клей был эффективно сшит с черепом. С помощью сверла диаметром 0,031 дюйма осторожно просверлите два отверстия в черепе с двусторонней скоростью 5000 оборотов в минуту или оборотов в минуту, избегая сверления в мозге. Нанесите каплю физраствора для усиления сверления отверстий от заусенцев. Для имплантации глубинных электродов гиппокампа сверлить на 3 миллиметра сзади и на 3 миллиметра латерально от брегмы.

Просверлите одно отверстие для заусенца для электрода сравнения над мозжечком, позади лямбды на расстоянии 6 миллиметров сзади и 0 миллиметров сбоку от брегмы. Далее установите шестиконтактную тумбу с собранными электродами в держатель электродов на стереотаксической раме. Выровняв электроды над соответствующими отверстиями для заусенцев, медленно опустите и перемещайтесь по гарнитуре, чтобы расположить два кончика биполярных электродов прямо над левым и правым отверстиями заусенцев гиппокампа, и, при необходимости, отрегулируйте электрод сравнения так, чтобы он зависал над отверстием, над мозжечком.

Когда поворотные электроды гиппокампа окажутся прямо над отверстиями, обнулите ось z и медленно опустите электрод до минус трех миллиметров в правый и левый гиппокамп и направьте электрод сравнения в отверстие над мозжечком. Приготовьте стоматологический цемент, смешав порошок и жидкость в миске для смешивания, затем покройте поверхность черепа, электроды и пространство между поверхностью черепа и дном пьедестала стоматологическим цементом.

Как только цемент высохнет и затвердеет, отсоедините держатель электродов от стереотаксического рычага, поднимите кронштейн и снимите держатель с пьедестала. После подкожного введения мыши кетопрофена и нормозола извлеките животное из стереотаксической рамки, чтобы переместить животное на подогретую подушку в клетке вивария. Когда животное полностью придет в себя, верните его в клетку вивария, кормите его мягкой пищей и ежедневно следите за потерей веса в течение 72 часов после операции.