Тестирование функции сенсорного нерва на модели мыши, подвергшейся хирургической денервации

Начните с мыши, находящейся под наркозом, с обнаженной спинной кожей. Продезинфицируйте участок и накройте его.

Сделайте разрез по средней линии от шеи до чуть выше хвоста.

Потяните за левую сторону кожи, чтобы создать кожный лоскут и обнажить подлежащие ткани.

Поместите мышь под микроскоп и найдите сенсорные нервы.

Осторожно потяните и удалите эти нервы, не нарушая кровеносные сосуды.

Увлажните ткань и удалите оставшиеся нервы из кожного лоскута, создав денервированный участок.

С правой стороны оставьте нервы нетронутыми в качестве контроля. Зашиваем разрез кожи.

Дайте мыши восстановиться.

Чтобы оценить стабильную денервацию через несколько недель после операции, используйте ту же денервированную мышь с выбритой тыльной кожей.

С помощью иглы уколите в контрольную зону, генерируя механическую стимуляцию.

Это возбуждает нижележащие нервы, посылая сигнал в мозг и заставляя мышь реагировать.

Тем не менее, укол денервированной области не вызывает ответной реакции, что подтверждает роль сенсорных нервов.

Обезболите животное. Побрейте всю тыльную поверхность кожи и очистите эту область аналогично процедуре биопсии. Теперь сделайте разрез с помощью стерильного скальпеля вдоль спинной средней линии от основания шеи примерно на полсантиметра над хвостом. Используя стерильные тупые щипцы, мягко отразите кожу с левой стороны в сторону от бока, чтобы визуализировать подлежащие ткани от лопаточных жировых пакетов возле шеи до чуть выше задней конечности.

Теперь определите дорсальные кожные нервы под рассекающим световым микроскопом. Они выглядят как белые нити, которые проходят каудально через полупрозрачную фасцию стенки ствола, прежде чем сделать резкие изгибы и войти в рыхлую соединительную ткань под кожей. Далее с помощью ультратонких щипцов удалите нервы исключительно с левой стороны животного, расположенные на анатомических участках от Т3 до Т12, выщипывая их от места изгиба их сегментов у стенки туловища к местам их входа в кожу.

Расположите щипцы вертикально и захватите нервы примерно на полсантиметра ниже мест их изгиба. После захвата потяните вверх, чтобы нерв растянулся, и отделитесь от окружающих тканей, чтобы удалить их. Избегайте повреждения соседних кровеносных сосудов. Обязательно поддерживайте влажность тканей на протяжении всей процедуры, периодически нанося капли 0,9% стерильного солевого раствора.

Продолжайте удалять все нервы, идущие от стенки туловища к коже, но не разрушайте нервы в плотной фасции стенки туловища. Затем удалите все нервы с открытого кожного лоскута. Эти волокна состоят из дистальных ветвей тыльной стороны кожных нервов и выглядят как белые ветвящиеся нити, время от времени расположенные в соединительной ткани на дермальной стороне кожного лоскута.

Чтобы удалить эти тонкие ветви, расположите щипцы примерно параллельно дермальной поверхности, захватите нервы и выщипните их вверх. Удалите таким образом все видимые нервы. Не прокалывайте кровеносные сосуды и кожу.

На этом этапе важно избежать разрыва соседних кровеносных сосудов. Если вы обнаружили нерв с прилегающим кровеносным сосудом, проследите за ним вентрально до области, где нет соседнего сосуда, и удалите его путем выщипывания.

Теперь тупо отразите кожу с правой стороны дорсального разреза по средней линии, но не удаляйте нервы. Это будет служить контралатеральным фиктивным управлением. Наконец, наложите швы на животное и наблюдайте после операции, как и раньше. Позже, чтобы подтвердить стабильную потерю нервов через несколько недель после операции, аккуратно проколите денервированный участок с помощью стерильной иглы для подкожных инъекций. Обратите внимание, реагирует ли животное на содрогание или поворот головы. Если участок кожи был стабильно денервирован, животное будет проявлять незначительную реакцию или вообще не будет проявлять.