Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:06 мин. • July 8th, 2025
Закрепите белоглазую дрозофилу в держателе на арене звукозаписи.
Расположите источник света рядом с мухой.
Вживите заземляющий электрод в спину мухи.
Вставьте записывающий электрод во внешнюю периферию глаза мухи, рядом с фоторецепторными клетками сетчатки, содержащими фотопигмент.
Темно-адаптируйте мушку на короткое время. При этом метародопсин, активируемая светом форма фотопигмента, превращается в родопсин, его неактивную форму.
Подайте импульс оранжевого света высокой интенсивности. При этом любой оставшийся метародопсин превращается в родопсин.
Далее нанесите импульсы синего света. Синий свет преобразует родопсин в метародопсин, инициируя сигнальный каскад и открывая определенные ионные каналы.
Это вызывает непрерывный приток положительных ионов и устойчивую деполяризацию даже после удаления синего света — длительного деполяризующего послепотенциала, или PDA, зарегистрированного электродом.
Теперь снова нанесите импульсы оранжевого света, чтобы преобразовать метародопсин в родопсин.
Это останавливает сигнальный каскад, завершает PDA и реполяризует мембрану фоторецептора.
Поместите держатель мухи в темную клетку Фарадея на магнитный блок и убедитесь, что муха находится примерно в пяти миллиметрах от конца световода. Поместите записывающий электрод над глазом мухи, а заземляющий электрод — над верхней частью спины мухи с помощью микроманипуляторов. Затем вставьте заземляющий электрод в заднюю часть мухи с помощью микроманипуляторов.
Вставьте записывающий электрод во внешнюю периферию глаза мухи, желательно с помощью микроманипуляторов. Закройте клетку Фарадея и выключите свет в комнате, чтобы дать возможность адаптироваться к темноте на пять минут. Введите параметры, начиная с длительности импульса 500 метров в секунду, интервала импульса 60 секунд и количества импульсов, равного шести.
Для измерения КПК установите генератор импульсов главной скорости в режим Train. Затем дайте 5-секундный световой импульс максимальной интенсивности с помощью оранжевого фильтра. Проверьте реакцию напряжения. Замените оранжевый фильтр на широкополосный синий фильтр и подайте три 5-секундных световых импульса с максимальной интенсивностью. Проверьте реакцию напряжения.
Подождите не менее 60 секунд в темноте. Замените синий фильтр на предыдущий оранжевый. Затем подайте два световых импульса по 5 секунд с интервалом в 60 секунд. Проверьте реакцию напряжения.