Живая съемка Спинной Аксоны Корневая после ризотомия

Общая цель этой процедуры заключается в исследовании регенерации дорсального корешка с целью обнаружения средств, способных вызвать значительную регенерацию после травм спинномозгового корешка. Это достигается путем создания спинальной геми-ламинэктомии, которая обнажает правый пятый дорсальный корешок L и позволяет визуализировать меченые YFP положительные аксоны в спинном мозге и дорсальном корешке. Затем спинной корень L five тщательно измельчается, чтобы обеспечить минимальное кровотечение.

Затем после раздавливания визуализируется место раздавливания, чтобы проверить положение поврежденного дорсального корешка в очаге поражения. В течение нескольких временных точек визуализируются место повреждения и зона входа в дорсальный корешок, чтобы определить способность поврежденных аксонов регенерировать в спинной мозг. В конечном счете, можно получить результаты, которые показывают, что регенерирующие аксоны быстро иммобилизуются и остаются неподвижными, когда они входят в зону входа в дорсальный корешок или DREZ.

Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как визуализация мертвого животного, заключается в том, что мы можем многократно визуализировать эту систему на живом животном в течение нескольких недель или даже месяцев. Сначала поместите термостатическую грелку под флуоресцентный стереомикроскоп и отрегулируйте выходную мощность до 32,5 градусов Цельсия на грелке, отрегулированную до 32,5 градусов Цельсия Предварительно подогрейте стерильный раствор Рингера до 32,5 градусов Цельсия для орошения спинного мозга Во время операции обезболите животное внутрибрюшинной инъекцией коктейля ксилазина и кетамина. Начальная доза анальгетика бупренорфина также вводится подкожно.

Подходящий уровень анестезии достигается тогда, когда пальпируемый рефлекс отсутствует и животное не реагирует на пощипывание пальца ноги. Как только анестезия подтвердится, побрейте верхнюю часть спины с помощью маленьких машинок для стрижки животных и нанесите одну маленькую каплю лосьона для удаления волос на выбритую область с помощью ватных палочек. Через несколько минут удалите нанесенный лосьон и остатки шерсти мыльным раствором.

Наконец, использование марлевых губок, пропитанных 70% этанолом, для полной очистки операционного поля. Положите животное на грелку и продезинфицируйте кожу тампонами, смоченными на 70% этанолом. Стерильная хирургическая простыня должна быть применена в демонстрационных целях.

В этом видео он не показан. При светлопольном освещении на стереомикроскопе сделайте двух-трехсантиметровый разрез по средней линии на коже спины. При необходимости используйте ватные тампоны для остановки кровотечения.

Отразите мускулатуру позвоночника с помощью тонких щипцов и костных челюстей. Обнажить нижележащие поясничные позвонки. Обнажите L-три и S один сегменты позвоночника с помощью правосторонней геми-ламинэктомии с использованием меньших R-присяжных, а затем перфузируйте полость теплым стерильным раствором Рингера.

Расположите животное на опорной подушке из свернутой хлопчатобумажной марли. Для уплощения позвоночного столба. Используйте крючки для втягивания для расширения открытой области.

На этом этапе, примерно через 30 минут после первой инъекции анестетика, следует ввести добавку для того, чтобы животное полностью обезболилось. Переключитесь на флуоресцентное возбуждение, чтобы визуализировать, почему FP мечет аксоны. С помощью кончика иглы 27 с половиной калибра сделайте небольшой разрез в твердой мозговой оболочке, расположенной над пятым спинным корешком, несколько раз проработайте раствором Рингера и аккуратно очистите ватными тампонами.

Определите участок, который нужно раздавить, и сделайте снимки всей открытой неповрежденной области. Это поможет определить место повреждения на последующих сеансах визуализации. Затем вставьте с одной стороны пару тонких щипцов.

Должным образом закройте щипцы аккуратно, но крепко, удерживая медиальную часть корня L five в течение 10 секунд, а затем осторожно отпустите щипцы. Многократно вымойте физиологическим раствором и аккуратно очистите ватными палочками. Получите несколько изображений всей экспонированной области, включая место раздавливания и DREZ до и сразу после раздавливания, как при низком, так и при большом увеличении.

После плотной визуализации наложите кусок тонкой синтетической матричной мембраны, а затем искусственную твердую мозговую оболочку поверх обнаженного спинного мозга таким образом, чтобы они точно поместились в открытое окно спинного мозга. Закройте мускулатуру стерильными пятью швами, а разрез по средней линии закройте раневыми зажимами. Вводите растворы рингера подкожно и вводите бупренорфин в качестве послеоперационной анальгезии путем внутримышечной инъекции каждые 12 часов в течение двух дней.

Обезболите животное ксилазином и кетамином, как описано ранее, и снимите зажимы для раны и швы. Снимите искусственную твердую мозговую оболочку и тонкие пластыри с синтетической матрицей и храните их в стерильной пробирке, содержащей раствор Рингера, для последующего повторного использования. Затем аккуратно удалите скопившуюся соединительную рубцовую ткань с помощью изогнутого кончика иглы 26 калибра и тонких щипцов, часто перфузирующих теплым раствором Ringer.

Повторно обнажите операционное поле, включая место дробления и зону входа в дорсальный корешок, и переместите меченные YFP аксоны, изображенные на предыдущих сеансах, для продолжения визуализации во время регенерации. Здесь сразу после раздавливания показаны четыре поверхностных аксона, помеченных YFP, обозначенных цветными стрелками. Через три дня после раздавливания все четыре аксона расширяют один нейрит, который прорастает через место раздавливания, как показано через два и пять дней после раздавливания.

Нейриты остаются стабильными и не происходит дополнительного роста из этих или других проксимальных аксонов. На четвертый день регенерирующие нейриты тоньше и тусклее, чем пощаженные аксоны. Повторная визуализация этих аксонов на их кончиках каждые два-три дня в течение еще двух недель показывает, что они не росли вперед и не втягивались, а оставались неподвижными с отеком кончиков и стержней некоторых аксонов.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как обнажать, раздавливать и наблюдать за корнем L 5 do, чтобы лучше понять механизмы, которые препятствуют или способствуют регенерации аксонов.