Регистрация возбуждающих постсинаптических потенциалов нейронного поля в острых срезах гиппокампа

Поместите срез гиппокампа мыши в погружную камеру, наполненную искусственной спинномозговой жидкостью (aCSF).

Закрепите ломтик удерживающей сеткой, чтобы предотвратить движение.

Непрерывно циркулирует оксигенированный аКСФ для поддержания жизнеспособности нейронов.

Установите электроды сравнения для обеспечения стабильного опорного напряжения.

Расположите электроды для стимуляции и записи на одной линии и параллельно пирамидальному слою CA1 гиппокампа.

Применяйте электрические импульсы.

Эти импульсы стимулируют нейроны, заставляя потенциал-зависимые ионные каналы открываться, позволяя положительным ионам поступать внутрь и запуская потенциалы действия.

Эти потенциалы действия распространяются вдоль нейронов и индуцируют высвобождение возбуждающих нейротрансмиттеров в синаптическую щель.

Нейротрансмиттеры связываются со специфическими рецепторами на постсинаптических нейронах, обеспечивая положительный приток ионов и приводя к изменению мембранного потенциала — возбуждающего постсинаптического потенциала, или EPSP.

Регистрирующий электрод измеряет EPSP от популяции нейронов в пределах регистрирующей области — поля EPSP.

Предварительно замочите небольшой кусочек бумаги для чистки объектива и капроновую сетку, закрепленную на U-образной платиновой проволоке, в камере для погружения на несколько минут. После этого снимите-образную платиновую проволоку. Выключите переработку и положите ломтик на бумагу для чистки объектива. Затем сразу же поместите сетку для удержания среза поверх среза.

Включите насос и дайте срезу уравновеситься в течение 30 минут, не опуская объектив в ACSF. Тем временем заполните записывающий электрод ACSF и установите его в держатель пипетки.

Затем поместите испытанный вольфрамовый электрод с эпоксидной изоляцией в держатель манипулятора, а провод сравнения — в камеру для среза. Добавьте второй электрод сравнения в камеру и подсоедините его к контрольному гнезду головного столика записывающего электрода.

В программном обеспечении для управления усилителем нажмите на поле Zero-clamp Mode, затем дважды щелкните на поле Output Gain List. Выберите коэффициент усиления 100. Дважды кликните по фильтрующему блоку высоких частот bessel. Выберите частоту 3 килогерц и дважды щелкните по блоку фильтра нижних частот AC, чтобы выбрать частоту 0,1 герц.

В программном обеспечении для записи нажмите «Получить открытый протокол». Выберите протокол, который имеет настройки, позволяющие проводить эпизодическую стимуляцию и оцифровку усиленных потенциалов на частоте от 10 до 20 килогерц в течение 50-100 миллисекунд, и который автоматически запускает изолятор стимулов через 10 миллисекунд после начала эпизодической записи.

Установите электроды для стимуляции и записи на одной линии и параллельно пирамидальному слою. Затем нажмите «Получить протокол редактирования» и выберите вкладку «Триггер» во всплывающем окне. Нажмите на поле «Источник триггера» и выберите «Пробел» в качестве источника триггера. Затем нажмите кнопку OK и нажмите кнопку Record, чтобы начать сбор данных.

В программном обеспечении изолятора стимулов нажмите на блок управления напряжением и введите ноль. Нажмите кнопку «Скачать». После этого нажмите на окно «Программное обеспечение для записи» и нажмите пробел. Повторите этот цикл, последовательно вводя значения от 1 000 до 8 000. Соотнесите силу воздействия со значениями наклона FEPSP и определите необходимую силу воздействия для получения 40% от максимального значения наклона FEPSP. Щелкните поле Управление напряжением и введите заданное значение. Затем нажмите кнопку «Скачать».

В программном обеспечении для записи нажмите кнопку «Стоп», а затем меню «Захват». Нажмите «Редактировать протокол» и выберите вкладку «Триггер» во всплывающем окне. После этого нажмите на поле «Источник триггера» и выберите «Внутренний таймер» в качестве источника триггера. Нажмите кнопку OK, а затем кнопку Record, которая запускает автоматическую запись потенциалов поля каждые 60 секунд. Нажмите кнопку «Стоп» через 30–60 минут.

В программном обеспечении для записи нажмите «Получить открытый протокол» и выберите тот же протокол, что и для базовой записи. Нажмите кнопку OK, а затем нажмите Запись. Продолжайте автоматически запускать полевые потенциальные записи в течение двух-четырех часов. Когда запись будет завершена, нажмите кнопку «Стоп», чтобы прервать запись.