Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:53 мин. • July 8th, 2025
Закрепите препарат ствола головного мозга и спинного мозга от новорожденного грызуна в регистрирующей камере с потоком оксигенированного ХКФ. Удалите тонкую ткань, покрывающую препарат.
Нейронная сеть ствола мозга генерирует ритмичную электрическую активность, называемую взрывом на вдохе, которая передается через моторные нейроны четвертого вентрального нервного корешка спинного мозга, или С4, для контроля дыхания.
Расположите записывающую пипетку рядом с нервным корешком и с помощью отсасывания втяните корень внутрь, образуя уплотнение.
Внутренние свойства нейронов ствола мозга вызывают приток натрия, деполяризуя мембрану и генерируя потенциал действия, за которым следует отток калия для реполяризации.
Последующая гиперполяризация предотвращает появление новых потенциалов действия до тех пор, пока натрий-калийная АТФаза не использует АТФ для восстановления мембранного потенциала.
Потенциалы действия распространяются в нервный корешок в виде ритмичных всплесков.
Проток лишенного кислорода аCSF нарушает выработку АТФ и ухудшает функцию АТФазы, задерживая потенциалы действия и уменьшая ритмичные всплески.
Переключение обратно на оксигенированный ФКСФ восстанавливает количество ритмичных всплесков.
При этой процедуре нервная ткань помещается в записывающую камеру вентральной стороной вверх. Фиксируют его штифтами в самой нижней части спинного мозга, а также в самой ростральной части ствола головного мозга. После этого удаляют паутинную оболочку, которая представляет собой тонкую ткань, покрывающую поверхность нервной ткани. Будьте осторожны, чтобы не удалить мягкую оболочку и кровеносные сосуды нервной ткани. Далее заполните электрод ACSF.
С помощью микроманипулятора осторожно расположите электрод вплотную к четвертому вентральному корню. Аккуратно отсасывайте нервный корешок с помощью шприца. Затем поместите электрод с нервным корешком к спинному мозгу. Впоследствии регистрируют электрофизиологическую активность, генерируемую нервной тканью в нормоксических условиях, в течение не менее 20 минут для определения исходных параметров препарата.
Переключите перфузионный раствор с карбоген-пузырькового ACSF на стимул гипоксии ACSF и записывайте в течение 15 минут. После этого переключите перфузионный раствор обратно на стандартный карбоген-пузырьковый ACSF и записывайте еще не менее 15 минут, прежде чем закончить запись.