Прямая электроретинограмма пигментного эпителия сетчатки у мыши

Начните с адаптированной к темноте мыши, находящейся под наркозом.

Нанесите на роговицу обезболивающие и расширяющие капли.

Поместите мышь на приподнятую платформу перед куполом с тусклым красным светом.

Закрепите заземляющий электрод подкожно на задней ноге, а электрод сравнения внутри рта.

Возьмите электрододержатель с капилляром, заполненным солевым раствором. Проведите по экрану, чтобы удалить пузырьки воздуха.

Полностью заполните кончик капилляра раствором соли.

Расположите капилляр на роговице для записи электроретинограммы с прямой связью или DC-ERG.

DC-ERG измеряет тонкие электрические реакции пигментного эпителия сетчатки или РПЭ.

РПЭ — это специализированный клеточный монослой, который поддерживает здоровье и структурную целостность фоторецепторных клеток.

Нанесите каплю смазки для глаз для поддержания проводимости и предотвращения высыхания.

Проверьте значения сопротивления для каждого глаза, чтобы убедиться, что они схожи и находятся в пределах допустимого диапазона.

Установите стабильный базовый уровень, а затем начните запись DC-ERG.

Чтобы расположить мышь и электроды для эксперимента, обезболите роговицу мыши, находящейся под действием, каплей 0,5% соляной кислоты пропаракаина, а затем расширите роговицу каплей 2,5% фенилэфрина гидрохлорида и 0,5% тропикамид.

Используйте первый из шести шагов, чтобы включить тусклый красный свет внутри купола и поместить мышь на стол с подогревом для записи. С помощью щипцов осторожно зафиксируйте кожу задней ноги, а одной рукой крепко удерживайте игольчатый электрод, другой рукой введите электрод подкожно в заднюю ногу, чтобы закрепить электрод на месте.

Поместите электрод из серебра/хлорида серебра в рот животного так, чтобы центрированная гранула располагалась вдоль задней щеки и удерживалась на месте за зубами.

Перед установкой капиллярных электродов на глаз расположите держатель электродов так, чтобы стеклянные капилляры были ориентированы вертикально, и покрутите держатель электрода указательным пальцем, чтобы удалить любые пузырьки, которые могли быть занесены.

С помощью иглы 25-го калибра заполните кончики капилляров HBSS и осмотрите капилляры, чтобы убедиться, что в кончиках нет пузырьков воздуха. Расположите держатель электродов так, чтобы открытые кончики капилляров, заполненных HBSS, находились в мягком контакте с роговицей, и, стараясь не попасть в пузырьки, переверните дозатор геля для глаз с смазкой, чтобы сбросить первоначальные капли. Затем нанесите каплю лубрикантного геля для глаз на каждый глаз, чтобы сохранить проводимость и предотвратить высыхание во время записи.