Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:53 мин. • July 8th, 2025
Смонтируйте живую муху дрозофилы в трубку с открытой головой, усиками приклеенными к липкой ленте и закрепленными удерживающим стержнем.
Держите препарат под постоянным потоком увлажненного воздуха, чтобы предотвратить высыхание.
Вставьте электрод сравнения через клипеус, поддерживающую конструкцию, защищающую ротовые органы, чтобы добраться до кровеносной системы.
Поместите записывающий электрод рядом с сенсиллумом, органом чувств насекомого.
Вставьте электрод в основание сенсиллума.
Записывайте сигналы с определенными шипами, чтобы подтвердить правильное расположение электродов рядом с нейронами обонятельных рецепторов.
Подсоедините картридж с тестируемым одорантом к подающей трубке.
Расположите трубку так, чтобы она была направлена на антенну мухи, регулируя высоту и расстояние до электродов.
С помощью программного обеспечения установите скорость потока запаха и дозировку, затем выпустите одорант.
Теперь запишите электрические сигналы, чтобы зафиксировать реакцию нейронов мухи на запах.
Чтобы сделать запись, вставьте электрод сравнения в клипеус быстрым и плавным движением. Поместите его чуть ниже кутикулы, где он будет соприкасаться с гемолимфой. Далее медленно опускайте записывающий электрод до тех пор, пока он не войдет в ту же плоскость обзора, что и целевой сенсиллум. Затем вставьте записывающий электрод в сенсиллярное основание.
Прежде чем продолжить, убедитесь в высоком соотношении сигнал/шум с идентифицируемыми пиками от нейронов at4A и at4C. Нейрон at4A должен срабатывать не быстрее 20 герц.
Теперь подключите картридж к трубке подачи одоранта. В этом случае прилагается картридж с пальмитолеиновой кислотой. Затем с помощью микроманипулятора маневрируйте картриджем в сторону препа, направляя его на голову. Расположите наконечник картриджа так, чтобы он был направлен прямо на антенну с расстояния около 4 миллиметров. Патрон также должен находиться примерно на 1 миллиметр выше затвора.
Картридж может быть близко ограничен электродами и затвором. В идеале он должен находиться на расстоянии не менее четырех миллиметров от любого электрода. Для стимуляции установите регулятор расхода одоранта на периоды в 500 миллисекунд и используйте скорость потока 500 миллилитров в минуту. Для каждого всплеска стимула записывайте электрическую активность в течение 10 секунд.