Загрузка и разгрузка микроэлектродного FM-красителя в нервных клетках личинок дрозофилы

Начните с личинок дрозофилы, с обнаженных мышечных и нервных волокон, погруженных в раствор, содержащий везикулы флуоресцентного мембранного красителя, или FM-красителя.

FM-краситель связывается с липидами в клеточной мембране, образуя над ней флуоресцентное покрытие.

С помощью блока микроманипулятора расположите наконечник всасывающего микроэлектрода под микроскопом.

Сосредоточьтесь на нервных волокнах и микроэлектроде.

С помощью отрицательного давления всасывайте петлю нервного волокна в микроэлектрод.

Применяйте импульсы тока для стимуляции нервного волокна.

Это запускает нервно-мышечное соединение, где моторный нейрон соединяется с мышечным волокном, чтобы инициировать эндоцитоз синаптических везикул.

Во время этого процесса клетка поглощает мембрану, покрытую FM-красителем, образуя окрашенные эндоцитарные везикулы, идеально подходящие для визуализации пресинаптических стадий нейротрансмиссии.

Смойте краситель FM и замените наружный раствор.

Подайте импульсы тока, чтобы выгрузить из ячейки везикулы, окрашенные FM-красителем.

Для электростимуляции подготовьте отсасывающую пипетку с помощью съемника микроэлектродов, чтобы получить требуемый размер конуса и наконечника. После этог