Анализ переработки синаптических везикул и поглощения флуоресцентного красителя личинками дрозофилы

Поместите живой нервно-мышечный препарат личинок дрозофилы в записывающую камеру, содержащую физиологический раствор, не содержащий кальция.

Личиночные нейроны экспрессируют светочувствительный катионный канал.

Перейдите на физиологический раствор с добавлением кальция, содержащий флуоресцентный краситель.

Краситель слабо флуоресцирует в неинтернализованном состоянии, но сильно при интернализации нейронами.

Подсвечивайте личинку синим светом.

Это активирует канал, индуцируя приток катионов и деполяризацию нейронов, инициируя потенциал действия.

Потенциал действия достигает синаптического окончания в нервно-мышечном соединении, обеспечивая приток кальция и везикуловый экзоцитоз.

Впоследствии мембрана, связанная с красителем, интернализуется во время переработки везикул.

Умойтесь солевым раствором, не содержащим кальция, чтобы остановить повторение везикул и удалить любой невнутренний краситель.

Визуализируйте сигнал флуоресценции.

Затем введите не содержащий красителей кальций физиологический раствор и снова осветите.

Это индуцирует другой потенциал действия, приток кальция и экзоцитоз везикул-содержащих красителей.

Снова визуализируйте сигнал.

Выделение красителя за счет везикулярн