Оптогенетическая электрофизиологическая регистрация клеток со светозависимыми ионными каналами

Поместите покровное стекло, содержащее эмбриональные клетки почек, экспрессирующие светозависимые ионные каналы и флуоресцентный репортерный белок, на измерительную камеру с применением кремния. Закройте его и добавьте внешний буфер.

Расположите эту камеру под микроскопом. Поместите электрод для ванны, наполненный агаром. Перфуз с буфером для удаления остатков среды и омертвевших клеток.

С помощью флуоресцентного фильтра определите целевую клетку и сфокусируйтесь на ней.

Прикрепите к микроманипулятору патч-пипетку. Надавите, чтобы предотвратить засорение, и подойдите к камере.

Расположите пипетку рядом с клеткой и ослабьте положительное давление, чтобы на кончике образовался мембранный пластырь.

После формирования мембранного пятна приложите отрицательное давление, чтобы разорвать мембрану.

Подайте свет определенной длины волны, чтобы открыть ионные каналы. Движение ионов регистрируется как изменение напряжения электродом.

Для начала загерметизируйте измерительную камеру кремнием, чтобы предотвратить утечку внешнего буфера. Затем поместите одну покровную крышку в камеру и закройте ее. Осторожно заполните камеру внеклеточным буфером, чтобы предотвратить отслоение клеток. Затем помес