JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 3:09 мин • July 8th, 2025
Возьмите срез мозга мыши, содержащий медиальный таламус, или МТ, проецирующийся на переднюю поясную кору, или ACC.
Закрепите срез в многоэлектрической матрице, перфузированной кислородосодержащей aCSF для записи электрических сигналов.
Поместите положительные и отрицательные электроды и примените стимуляцию постоянным током (DCS), генерируя электрическое поле на срезе.
Отключите DCS и поместите электрод в МТ. Подайте стимул для вызова потенциалов действия в нейронах таламуса, запуская высвобождение нейромедиаторов.
Нейротрансмиттеры вызывают приток ионов в нейроны ACC и генерируют электрические сигналы, называемые вызванными стимуляцией синаптическими реакциями.
Реактивируйте DCS для мониторинга его влияния на синаптические реакции ACC.
Затем деактивируйте DCS и введите препараты, вызывающие судороги.
Препараты увеличивают возбудимость нейронов, заставляя таламический стимул производить непрерывные всплески сигналов в ACC, называемые вызванными эпилептическими припадками.
Наконец, реактивируйте DCS для оценки его влияния на судороги путем измерения уменьшения амплитуды и продолжительности припадков.
В этой процедуре необходимо обеспечить генерацию однородных электрических полей путем пропускания токов между двумя параллельными серебряными проволоками, покрытыми хлоридом серебра, которые размещены внутри камеры MEA. Если проблем нет, DCS должна оставаться в диапазоне от 0,5 до 2 миллиампер.
Далее выключите DCS и стимулируйте таламус вольфрамовым электродом. Чтобы получить максимальные синаптические ответы в ACC, запишите от 10 до 20 ответов и усредните их. Затем включите DCS и одновременно стимулируйте таламус. Оцените изменения амплитуды ответа АКК, вызванного таламической стимуляцией, во время ДКБ.
Теперь выключите DCS. Добавьте в перфузионный раствор 250 микромоляров 4-AP и 5 микромоляров бикукуллина и подождите два-три часа. Если препараты воздействуют на срез мозга, он должен вызывать корковые судорожные реакции. Затем соберите от 10 до 20 передних поясных корковых реакций и измерьте амплитуду и продолжительность электрически вызванных реакций коры головного мозга.
Далее включите DCS и одновременно стимулируйте таламус. Оцените изменения амплитуды и продолжительности вызванных корковых судорожных реакций во время применения ДКБ. После этого замените перфузионный раствор свежим aCSF, чтобы вымыть препараты.