Оценка взаимодействия глутаматергических нейронов и клеток глиомы в кокультуре

Начните с микрофлюидного устройства, покрытого ламинином, расположенного над структурированной многоэлектродной матрицей или МЭА.

Устройство несет культивируемые корковые глутаматергические нейроны, полученные из iPSC, прикрепленные к микроэлектродам MEA.

Эти нейроны общаются с помощью электрических сигналов. Запишите эти сигналы как базовую активность нейронов.

Затем засейте устройство богатыми глутаматом детскими высокодифференцированными клетками глиомы, типом опухолевых клеток головного мозга, и инкубируйте.

Со временем клетки глиомы проникают в канал и прикрепляются, устанавливая кокультуру. Позже клетки глиомы выделяют глутамат, возбуждающий нейромедиатор.

Высвобожденный глутамат взаимодействует с нейрональными рецепторами, что приводит к притоку ионов кальция и натрия, что вызывает деполяризацию мембран нейронов.

Это индуцирует возбудимость нейронов и усиливает нейронную активность.

Повторите запись электрических сигналов, и значительное увеличение после совместного культивирования указывает на успешное взаимодействие нейронов и клеток глиомы.

Засейте трипсинизированные клетки UW479 и BT35 поверх зрелых адгезивных глутаматергических нейронов в каждом специализированном микрофлюидном устройстве. Сокультуры выдерживают в течение двух дней в контролируемой среде при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа с глутаматергическим нейроном D11 и последующей средой.

Подсчитайте количество клеток глиомы высокой степени злокачественности у детей с помощью микроскопических изображений, проанализированных с помощью программного обеспечения для анализа изображений, чтобы оценить их жизнеспособность, и рассчитать процент клеток. Поместите МФД в записывающее устройство и используйте коммерчески доступное программное обеспечение для выполнения электрофизиологической записи глутаматергических нейронов на 21-й день.

Перед посевом клеток глиомы высокой степени злокачественности у детей проводят вторую электрофизиологическую регистрацию дифференцированных глутаматергических нейронов, культивируемых в качестве контроля, параллельно кокультуре.