Оценка притягательной или отталкивающей активности белков с помощью нейронов гиппокампа

Начните с чашки, содержащей кремниевую матрицу, которая имеет несколько небольших каналов, подключенных к входным и выходным портам.

Введите тестируемый белок с отталкивающей активностью через входное отверстие для заполнения каналов.

Инкубируйте, чтобы обеспечить прилипание белка в области канала, формируя тестовые белковые зоны, затем промойте.

Снимите матрицу, наложите на покрытый участок контрольный белок, обладающий привлекательной активностью, и инкубируйте.

Это облегчает прилипание контрольного белка к пустым участкам между зонами тестируемого белка, создавая зоны контрольного белка с чередующимся полосатым рисунком, а затем промывая.

Добавьте ламинин для покрытия полосатого участка, затем постирайте.

Засейте покрытый участок одноклеточной суспензией нейронов гиппокампа и инкубируйте.

В тестовой белковой зоне нейроны взаимодействуют с белками, запуская сигналы, которые заставляют нейроны отталкиваться, подавляя их прикрепление.

Напротив, нейрон-белковые взаимодействия в зоне контрольного белка способствуют прикреплению нейронов, поддерживая их рост и удлинение аксонов.

Приготовьте флуоресцентно меченные рекомбинантные белки в PBS. Сделайте по 25 микролитров на каждое полосат