Флуоресцентное иммуноокрашивание нейронов гиппокампа крыс в микрофлюидном чипе

Возьмем микрофлюидный чип, содержащий крысиные нейроны гиппокампа.

Чип имеет соматические и аксональные резервуары с отсеками, разделенными микробороздками, эффективно разделяющими нейроны и изолирующими соматическую и аксональную области.

Удалите среду и добавьте формальдегид. Инкубация для фиксации нейронов и сохранения их структуры.

Удалите излишки формальдегида и промойте буфером. Затем добавьте моющее средство, чтобы проникнуть в нейроны.

Замените моющее средство блокирующим раствором, чтобы заблокировать неспецифические места связывания.

Удалите блокирующий раствор и инкубируйте с первичными антителами, которые связываются со специфическими нейрональными синаптическими маркерами, которые являются интегральными мембранными белками на синаптических везикулах.

Удалите несвязанные антитела и промойте буфером.

Инкубируйте с меченными флуорофорами вторичными антителами, которые связываются с первичными антителами, нацеленными на синаптические маркеры.

Удалите несвязанные вторичные антитела и промойте буфером.

Под конфокальным микроскопом визуализируйте чип, чтобы визуализировать флуоресцентные нейронные синаптические маркеры.

Чтобы начать флуоресцентное иммуноокрашивание, удалите б