Выделение амилоидных фибрилл из экстракта мозговой ткани
Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:38 мин. • July 8th, 2025
Примите экстракт ткани мозга мыши, содержащий неамилоидные белки и амилоидные фибриллы, нерастворимый белковый агрегат.
Добавьте твердую сахарозу и перемешайте, увеличивая плотность раствора.
Перенесите его и центрифугируйте для отделения более плотных белков от мусора.
Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в буфере с более высокой концентрацией сахарозы, перемешайте и центрифугируйте.
Соберите верхний слой, содержащий несколько амилоидных фибрилл, в свежую пробирку, добавьте буфер для промывки и перемешайте.
Теперь выбросьте средний слой и перенесите обогащенную амилоидными фибриллами гранулу в пробирку, содержащую фракцию верхнего слоя, для максимальной изоляции.
Центрифугируйте объединенные фракции и выбросьте надосадочную жидкость. Добавьте буфер для пищеварения и инкубируйте для расщепления исключительно неамилоидных белков.
Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Промойте гранулы, чтобы удалить остатки переваренных белков.
Ресуспендируйте гранулу в солюбилизационном буфере на основе сахарозы, содержащем моющее средство, которое солюбилизирует оставшиеся неамилоидные белки.
Центрифугу, удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте вы
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео