Внутримозговая инъекция для анализа распределения цитомегаловируса мышей в мозге новорожденной мыши

Возьмем суспензию мышиного цитомегаловируса, генетически модифицированную для экспрессии усиленного зеленого флуоресцентного белка, что позволяет визуализировать.

Загрузите суспензию в шприц с прикрепленной иглой.

Далее обезболите щенка мыши, положив его на лед.

Определите место инъекции на голове щенка.

Вводите иглу перпендикулярно поверхности черепа до тех пор, пока она не достигнет бокового желудочка, спинномозговой жидкости или полости, заполненной спинномозговой жидкостью в головном мозге.

Ввести суспензию в боковой желудочек.

Дайте щенку восстановиться.

Введенный вирус циркулирует по желудочковой спинномозговой жидкости, достигая эпендимальных клеток маргинальной области и эпителиальных клеток сосудистого сплетения.

Вирус прикрепляется к поверхностным рецепторам на этих клетках, интернализуется, подвергается репликации и распространяется от клетки к клетке, вызывая острую инфекцию в сосудистом сплетении, маргинальной области и субвентрикулярной зоне.

Начните с стерилизации шприца объемом 10 микролитров и иглы 27-го калибра 70% спиртом. Затем загрузите в иглу 5 микролитров раствора для инъекций цитомегаловируса мышей или флуоресцентных микрошариков, осторожно потянув за поршень шприца.

После обезболивания и обездвиживания неонатальной мыши P0,5 путем помещения ее на лед на три-четыре минуты используйте метод реакции «щипки пальца ноги» для определения глубины анестезии. Отметьте место инъекции на мыши, находящейся под наркозом, с помощью нетоксичной лабораторной ручки на расстоянии примерно от 0,7 до 1,0 миллиметра латерально от сагиттального шва и на расстоянии от 0,7 до 1,0 миллиметра каудально от неонатальной брегмы. На этой схеме более подробно показан сайт.

Для ориентира отметьте нетоксичным маркером на расстоянии 2 миллиметра от кончика иглы. Далее введите иглу на глубину 2 миллиметра, перпендикулярно поверхности черепа в отмеченном месте инъекции. Затем медленно введите 5 микролитров цитомегаловируса мыши в боковой желудочек, не вскрывая кожу головы.

Другой группе мышей вводят 5-микролитровый раствор, содержащий флуоресцентные микрогранулы, тем же методом. После инъекции дайте игле оставаться на месте в течение 10-20 секунд, чтобы предотвратить обратный поток. Затем медленно извлеките иглу. Дайте введенным животным восстановиться в течение 5-10 минут в теплом контейнере, пока не восстановятся движения и общая реакция.