Разработка in vitro модели инфекции, вызванной вирусом Зика, в органоидах головного мозга

Возьмем многолуночный планшет, содержащий органоиды головного мозга человека в среде нейронной индукции.

Органоиды содержат стволовые клетки, радиальные глиальные клетки, нейральные клетки-предшественники или NPC, а также нейроны, расположенные в радиальном узоре, называемом розеткой, имитируя развивающийся мозг.

Удалите среду и промойте органоиды с помощью буфера.

Добавьте вирус Зика, взвешенный в буфере, в тестовые лунки и только буфер в контрольные лунки.

Инкубируются, позволяя вирусу связываться со своими рецепторами на NPC и усваиваться.

Вымойте для удаления неинтернализованных вирусов, затем добавьте свежую среду для нервной индукции и инкубируйте.

Интернализованные вирусы используют механизмы клетки-хозяина для образования новых вирусных частиц.

Размножение вирусов вызывает реакцию клеточного стресса, которая вызывает апоптоз, уменьшая количество NPC, доступных для развития органоидов.

Со временем инфицированные органоиды демонстрируют уменьшение размера и нарушение морфологии, что отражает аномальное развитие мозга у людей, инфицированных вирусом Зика.

Доведите 1X Balanced Salt Solution, 1X PBS и среду Neural Induction от Earle до 37 градусов Цельсия в водяной бане. Затем р