Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:20 мин. • July 8th, 2025
Поместите мозг дикого типа и мутантной дрозофилы в раствор, содержащий фиксатор и моющее средство. Инкубация с легким покачиванием.
Фиксатор сохраняет морфологию тканей, в то время как детергент проникает в клеточные мембраны.
Дайте мозгу осесть, затем удалите раствор.
Промойте салфетки с помощью буфера.
Добавьте блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.
Удалите раствор и добавьте первичные антитела, нацеленные на определенный белок, который регулирует развитие аксонов в нейронах грибовидного тела мозга, или MB.
Инкубируйте для стимулирования связывания антител.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.
Инкубируйте с фторконъюгированными вторичными антителами, нацеленными на первичные антитела.
Промойте еще раз, чтобы удалить несвязанные антитела, затем снова суспендируйте мозг в монтажной среде.
Закрепите мозги на предметном стекле и визуализируйте их под флуоресцентным микроскопом.
По сравнению с диким типом, мозг мутантов демонстрирует дефектный фенотип, с аксональными неправильными проекциями и отсутствующими долями MB.
Под микроскопом с помощью пипетки P200 перенесите от 10 до 15 препарированных мозгов одного и того же генотипа в ми
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео