Индуцирование нейровоспаления у личинок данио-рерио с помощью инъекции липополисахарида

Возьмите личинок рыбок данио, находящихся под наркозом, в чашке, выстланной агарозным гелем, и убедитесь, что мозг обращен вверх для инъекций.

Поместите чашку под микроскоп, чтобы визуализировать желудочки мозга, которые представляют собой заполненные жидкостью полости в развивающемся мозге.

Возьмите иглу для микроинъекций, содержащую раствор липополисахаридов или ЛПС, бактериального компонента, чтобы вызвать иммунный ответ.

Расположите иглу над тектумом мозга, областью, содержащей нейроны и резидентные иммунные клетки, в частности микроглию.

Проколите головной мозг иглой и введите раствор ЛПС в желудочек.

Микроглия в окружающих тканях связывается с ЛПС через толл-подобные рецепторы.

Связывание вызывает высвобождение провоспалительных цитокинов, которые привлекают нейтрофилы к участку, что приводит к нейровоспалению.

Нейтрофилы генерируют всплески активных форм кислорода и высвобождают протеолитические ферменты, что приводит к гибели нейронов.

Перенесите личинки, вызванные нейровоспалением, в культуральную среду, чтобы сохранить их для последующих анализов.

Настройте микроманипулятор так, чтобы кончик иглы аппарата для микроинъекций находился в том же поле зрения, что и личинки при