Моделирование индуцированной активными формами кислорода гибели нейронов в гранулярных нейронах мозжечка мышей

Возьмем культуру первичных гранулярных нейронов мозжечка у мыши.

Добавьте среду, содержащую перекись водорода, активные формы кислорода или АФК, и кратковременно инкубируйте.

Перекись водорода диффундирует в клетки и превращается в высокореактивные свободные радикалы.

Эти радикалы вызывают перекисное окисление липидов, нарушая целостность клеточной мембраны.

Кроме того, радикалы вызывают окислительные модификации в клеточных белках, нарушая их функцию.

Кроме того, они вызывают разрывы ДНК, что приводит к геномной нестабильности.

Радикалы также вызывают окислительное повреждение внутриклеточных органелл, в том числе митохондрий.

В ответ поврежденные митохондрии высвобождают цитохром с, который связывается с апоптотической протеазой, активирующей фактор-1, вызывая образование апоптосомы и превращение про-каспазы-9 в активную каспазу-9.

Каспазы 9 активируют казпазы палачей, еще больше расщепляя клеточные белки и приводя к апоптотической гибели нейронов.

Замените среду свежей, не содержащей перекиси водорода, чтобы остановить каскад сигнализации.

Для гибели клеток, вызванной АФК, обрабатывайте нейроны перекисью водорода при температуре от 75 до 100 микромоляров в течение пяти минут. Через пять минут переключите его на кондиционированные носители из параллельных языков и региональных параметров.

Из-за нестабильности перекиси водорода концентрация должна быть оптимизирована до уровня, который вызывает от 50% до 70% гибели клеток через 24 часа. Эта концентрация обычно составляет от 75 до 100 микромоляров.