Иммунофлуоресцентное окрашивание для визуализации пролиферировавших нейральных стволовых клеток в срезах мозга мышей

Возьмите фиксированные участки мозга мыши, содержащие нервные клетки, в том числе пролиферировавшие нейральные стволовые клетки, помеченные EdU, аналогом тимидина.

Обведите участки гидрофобной маркировкой, чтобы предотвратить растекание раствора.

Добавьте моющее средство, чтобы пропитать ткань. Постирайте, чтобы удалить излишки моющего средства.

Добавьте флуорофор для маркировки EdU. Удалите излишки флуорофоров.

С помощью флуоресцентного микроскопа подтвердите правильность окрашивания клеток, меченных EdU.

Примените блокирующий буфер, содержащий белки, чтобы предотвратить связывание неспецифических антител. Удалите лишние белки.

Инкубируйте с первичными антителами, которые связываются со специфическими белками в нейральных стволовых клетках. Удалите несвязанные антитела.

Добавьте флуорофор-конъюгированные вторичные антитела для связывания первичных антител. Смойте несвязанные антитела.

Окрасьте ядра красителем и удалите излишки красителя.

Удалите гидрофобную маркировку, нанесите монтажный носитель и установите покровное стекло.

С помощью конфокального микроскопа рассмотрите срезы, чтобы визуализировать меченые нейральные стволовые клетки.

Чтобы окрасить участки ткани аналогом тимид