Определение токсичности, вызванной наночастицами, в нейронах с использованием микроглии в качестве суррогатного биосенсора

Возьмите микроглиальные культуры в многолуночный планшет, содержащий среды.

Замените половину среды в испытательной лунке на среды, содержащие наночастицы серебра, а в контрольной лунке — на автомобильные среды. Инкубировать.

Микроглия интернализует наночастицы, активируется и высвобождает провоспалительные цитокины.

Перенесите автомобильную среду и кондиционированную среду, содержащую эти цитокины, в фильтры, установленные на сборных пробирках.

Центрифуга удаляет наночастицы, сохраняя цитокины.

Переверните фильтры в новые сборные трубки, центрифугируйте и соберите фильтрующий материал. Добавьте свежий материал.

Далее берут культуры нейронов гипоталамуса.

Замените половину фильтрующего материала в контрольной лунке на автомобильный фильтрующий материал, а в испытательном колодце — на кондиционированный. Инкубировать.

Цитокины связываются с рецепторами на нейронах гипоталамуса, активируя сигнальные пути, которые вызывают гибель нейронов.

Добавьте резазурин и инкубируйте.

В живых клетках ферменты дегидрогеназы восстанавливают слабофлуоресцентный резазурин до флуоресцентного резоруфина.

Измерьте флуоресценцию.

Сниженная флуоресценция указывает на повышенную гибель нейронов гипоталамус