Генерация экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита на мышиной модели

Вводите пептиды, полученные из миелина, с адъювантом рядом с периферическими лимфатическими узлами мыши, находящейся под наркозом.

Пептид-адъювантные конъюгаты активируют антигенпрезентирующие клетки, или АПК, которые распознают и обрабатывают пептиды.

Затем APC мигрируют в лимфатические узлы и активируют аутореактивные Т-клетки.

Периодически вводят коклюшный токсин внутрибрюшинно, что нарушает плотные соединения между эндотелиальными клетками и повышает проницаемость гематоэнцефалического барьера.

Аутореактивные Т-клетки циркулируют в крови и пересекают гематоэнцефалический барьер, чтобы проникнуть в ткани мозга.

Эти клетки распознают пептиды на миелиновой оболочке и высвобождают цитокины.

Эти цитокины рекрутируют макрофаги и В-клетки к сайту.

Макрофаги выделяют активные формы кислорода, которые повреждают миелин-продуцирующие олигодендроциты, в то время как В-клетки взаимодействуют с Т-клетками, активируются и вырабатывают аутоантитела, нацеленные на миелиновую оболочку.

Это приводит к демиелинизации, нарушая нервную передачу.

Поднимите хвост мыши; постепенное опускание указывает на повреждение нерва, сигнализируя о начале аутоиммунного энцефаломиелита, или ЭАЭ.

Начните эту процедуру с анестезии мышей C57BL/6, которые были размещены в определенных условиях, свободных от патогенов, как описано в текстовом протоколе. Зафиксируйте обезболенную мышь в одной руке и введите 30 микролитров пептида MOG в полной флуоресцентной адъювантной эмульсии подкожно в каждый из боков задней ноги в непосредственной близости от паховых лимфатических узлов.

Теперь положите мышь на живот и введите 20 микролитров эмульсии пептида MOG в мягкую жировую ткань слева и справа у корня хвоста. Также введите немного капельки эмульсии в горлышко мыши. Введите мышке 100 микролитров раствора коклюшного токсина внутрибрюшинно. Держите голову мыши ниже центра тела, чтобы избежать инъекции в кишечник.

Замените поддерживающую диету на диету для разведения, чтобы обеспечить мышей пищей с более высоким содержанием энергии до того, как они перенесут ожидаемое клиническое заболевание. Повторите инъекцию коклюшного токсина через 48 часов после первой процедуры.

Проверяйте состояние здоровья мышей EAE каждое утро, заглядывая внутрь клеток. Оценивайте мышей EAE каждый день. Выньте каждую отдельную мышь, участвующую в эксперименте EAE, из клетки и проверьте, есть ли у хвоста тонус.

Двигайте пальцем хвост вверх. Здоровая мышь будет держать хвост поднятым. Если началось клиническое ЭАЭ, тонус хвоста будет ниже, что будет заметно при постепенном опускании хвоста. В конце концов, мышь вообще не сможет поднять хвост