Определение нарушения гематоэнцефалического барьера с помощью флуоресцентных красителей на мышиной модели EAE

Начните с раствора, содержащего зеленый флуоресцентный краситель, связанный с большой цепью декстрана. Затем добавьте раствор красного красителя, связанный с небольшой цепочкой декстрана.

Тщательно перемешайте красители и возьмите в шприц.

Введите эту смесь красителей внутривенно мыши, находящейся под наркозом, через ретроорбитальный синус, вену позади глаза.

Эта мышь страдает экспериментальным аутоиммунным энцефаломиелитом или ЭАЭ.

При этом состоянии гематоэнцефалический барьер нарушается с ослабленными плотными соединениями между эндотелиальными клетками кровеносных сосудов головного мозга с промежутками.

Дайте мыши полностью проснуться и восстановить подвижность, что позволит красителям циркулировать.

Красный краситель с маленькой цепью декстрана легко диффундирует через небольшие щели в ткани мозга, в то время как зеленый краситель, связанный с большой цепью декстрана, диффундирует при серьезном повреждении.

Количество каждого флуоресцентного красителя в ткани мозга коррелирует со степенью разрушения гематоэнцефалического барьера.

Для приготовления стоковых растворов декстрана растворите 10 миллиграммов трехкилодальтонного Dextan Texas Red в 500 микролитрах 0,9% раствора натрия хлорида, и 5 миллиграммов 10 килодальтонного Dextran AlexaFluor 488 в 250 микролитрах 0,9% раствора натрия хлорида.

Для рабочего раствора декстрана, непосредственно перед инъекцией, нанесите пипетку 55 микролитров 10 килодальтонного раствора Dextan AlexaFluor 488 на кусок герметизирующей пленки, затем добавьте 55 микролитров трехкилодальтонного раствора Dextran Texas Red. Смешайте и наберите 100 микролитров в одноразовый шприц тонкой очистки.

Далее положите на стол мышь под наркозом в боковом положении. Внутривенно введите 100 микролитров флуоресцентных индикаторов мыши, прежде чем мышь проснется. Дайте индикатору циркулировать в течение 15 минут.