Иммуноокрашивание черепно-лицевых тканей мышей

Провести криорезы неподвижных эмбриональных черепно-лицевых тканей мыши, состоящих из клеток нервного гребня.

Промойте срезы в буфере, содержащем неионогенное моющее средство, чтобы удалить встраивающую среду и проникнуть в мембраны, обеспечивая доступ к внутриклеточным мишеням.

Добавьте блокирующий раствор для насыщения неспецифических сайтов связывания.

Удалите излишки блокирующего раствора. Затем инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на ядерные антигены, такими как факторы транскрипции и маркеры пролиферации.

Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.

Инкубируйте с флуорофор-конъюгированными вторичными антителами для связывания с первичными антителами, связанными с антигеном.

Удалите несвязанные антитела с помощью буфера.

Добавьте среду для защиты от выцветания с флуоресцентным ядерным красителем и накройте покровным стеклом.

Краситель окрашивает ядра, а среда, препятствующая выцветанию, защищает флуоресцентные сигналы во время визуализации.

Визуализируйте срезы под флуоресцентным микроскопом, чтобы оценить экспрессию и локализацию ядерных маркеров, указывающих на пролиферацию клеток нервного гребня и сигнальную активность.

Промойте предметные стекла в 0,1%