JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:46 мин • July 8th, 2025
Провести криорезы неподвижных эмбриональных черепно-лицевых тканей мыши, состоящих из клеток нервного гребня.
Промойте срезы в буфере, содержащем неионогенное моющее средство, чтобы удалить встраивающую среду и проникнуть в мембраны, обеспечивая доступ к внутриклеточным мишеням.
Добавьте блокирующий раствор для насыщения неспецифических сайтов связывания.
Удалите излишки блокирующего раствора. Затем инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на ядерные антигены, такими как факторы транскрипции и маркеры пролиферации.
Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.
Инкубируйте с флуорофор-конъюгированными вторичными антителами для связывания с первичными антителами, связанными с антигеном.
Удалите несвязанные антитела с помощью буфера.
Добавьте среду для защиты от выцветания с флуоресцентным ядерным красителем и накройте покровным стеклом.
Краситель окрашивает ядра, а среда, препятствующая выцветанию, защищает флуоресцентные сигналы во время визуализации.
Визуализируйте срезы под флуоресцентным микроскопом, чтобы оценить экспрессию и локализацию ядерных маркеров, указывающих на пролиферацию клеток нервного гребня и сигнальную активность.
Промойте предметные стекла в 0,1% PBST три раза по пять минут каждый, чтобы смыть ОКТ и пропитать срезы. Добавьте 200 микролитров раствора для блокировки на каждое предметное стекло и выдерживайте при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем удалите блокирующий раствор, не промывая предметное стекло. Добавьте 100 микролитров первичного антитела, разведенного в блокирующем растворе, на каждое предметное стекло и инкубируйте в течение ночи при температуре 4 градуса Цельсия.
Промойте предметные стекла PBS три раза по 10 минут каждый при комнатной температуре. Добавьте 100 микролитров вторичного антитела, разведенного в блокирующем растворе, и инкубируйте в течение одного часа при комнатной температуре, защищенном от света. Промойте в PBS три раза по 10 минут каждый при комнатной температуре, но при этом защищенном от света месте. Чтобы установить слайды, добавьте две капли средства защиты от выцветания с DAPI на каждый слайд. Накройте крышкой и храните при температуре 4 градуса Цельсия до готовности к изображению.
В данной статье описывается протокол визуализации клеток нервного гребня в эмбриональных краниофациальных тканях мыши. Метод включает криосекционирование, окрашивание антителами и флуоресцентную микроскопию для оценки экспрессии ядерных маркеров.
Иммуноокрашивание тканей черепно-лицевой области мыши позволяет точно визуализировать ядерные маркеры в клетках нервного гребня, что способствует валидации мишеней на ранних стадиях исследований в области развития и регенерации. Количественная визуализация пролиферации и сигнальной активности помогает снизить механистические риски и повышает прогностическую достоверность программ на этапе поиска мишеней, сфокусированных на биологии черепно-лицевой области и скелета. Данный рабочий процесс обеспечивает надежную разработку методов анализа и трансляционную преемственность для доклинических модельных систем.
Данный протокол иммуноокрашивания интегрирован в континуум от этапа поиска мишеней до доклинических исследований, предоставляя базовые данные для валидации мишеней, разработки анализов и трансляционных исследований в области биологии черепно-лицевых структур и скелета.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026