Визуализация везикул в нейронах с помощью флуоресцентной визуализации

Принимайте нужную плазмиду в бессывороточных средах. Эта плазмида кодирует везикул-специфичные белки флуоресцентными метками.

В другую пробирку возьмите реагент для трансфекции, разведенный в бессывороточной среде.

Смешайте два раствора и инкубируйте.

Реагент для трансфекции соединяется с плазмидой, образуя комплекс.

Возьмите лунку, содержащую адгезивные нейроны в среде с сывороткой. Добавляем комплексы и инкубируем. Комплекс способствует проникновению плазмиды в клетку.

Откажитесь от среды, чтобы удалить неинтернализованные комплексы.

Добавьте свежую среду и затем инкубируйте.

Плазмида попадает в ядро для транскрибирования, а затем транслируется в специфические для везикул флуоресцентные белки, которые помечают везикулы в нейронах.

Используя флуоресцентный микроскоп при контролируемой температуре, получайте изображения через заданные промежутки времени.

Чтобы проанализировать изображения, определите параметры слежения.

Определите интересующий вас везикулу и запишите его координаты на каждом из изображений.

Скомпилируйте данные, чтобы визуализировать движение везикулы.

В этой процедуре смешайте 4 микрограмма плазмиды с 200 микролитрами среды, не содержащей сыворотки. В отдельной пр