Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:04 мин. • July 8th, 2025
Начните с химически фиксированных грудных клеток дикого типа и трансгенных дрозофил в буфере.
У трансгенных грудных клеток нервно-мышечные соединения дорсальных продольных мышц содержат нейроны, которые экспрессируют мутантный белок, вызывающий нейродегенерацию.
Удалите буфер и заморозьте грудную клетку, чтобы предотвратить повреждение тканей во время бисекции.
Добавьте свежий буфер и переложите грудные клетки в посуду для вскрытия.
Расположите грудную клетку вентральной стороной вверх и удалите скопления нервных клеток, чтобы обнажить среднюю линию.
Рассекайте пополам по средней линии, чтобы получить гемиторасы.
Удалите лишнюю ткань.
Инкубируйте гемиторациозы в блокирующем буфере для проникновения в мембраны и предотвращения связывания неспецифических антител.
Добавьте фторофор-конъюгированные антитела, нацеленные на гликопротеин, экспрессируемый в нейронах NMJ и мышечных актиновых филаментах.
Удалите несвязанные антитела.
Расположите гемиторасы на горке моста, добавьте монтажный материал и закрепите ткани.
Визуализируйте под микроскопом.
По сравнению с диким типом, мутанты демонстрируют сниженное окрашивание нейронов, что указывает на нейродегенерацию, в то время как мышцы демонс
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео